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【研究目的】本实验旨在研究盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture, CLP）脓毒症小鼠肝脏PD-L1分子的表达变化；探索应用抗PD-L1抗体治疗对脓毒症小鼠是否具有肝治疗作用，并检测其对肝脏内细胞因子表达的影响，以此探求其在脓毒症肝损伤中的作用，为脓毒症肝功能保护性的治疗提供新的实验依据。【研究方法】1、将16只C57BL/6小鼠随机分为假手术组（Sham，n=8）、CLP组（CLP，n=8），采用CLP术致脓毒症模型。于手术后24h取小鼠肝脏，分离左叶、右叶。左叶切割为约1.5cm×1.5cm×1cm大小后，立即行组织冰冻包埋，于冰冻切片机上行切片（厚度5μm）。切片经固定后行抗PD-L1的免疫组织化学染色，抗体标记物为辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）。显微镜下观察并分析两组切片中PD-L1表达水平。右叶切割出1cm×1cm×1cm大小，经匀浆后提取RNA，经反转录后行Q-RT-PCR，定量检测肝组织中PD-L1的mRNA表达水平。2、将32只C57BL/6小鼠随机分为假手术组（Sham, n=8）、CLP组（CLP, n=8）、同型对照组（Isotype, n=8）和抗PD-L1组（Anti-PD-L1, n=8），除假手术组外其余小鼠均行CLP术，同型对照组和抗PD-L1组于CLP术后1h分别经腹腔给予同型对照抗体或抗PD-L1抗体（50μg/200μl，每只）。手术24h后取小鼠心脏血检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartateaminotransferase, AST），并取小鼠肝组织行固定、石蜡包埋、切片和苏木精-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色，根据ALT、AST水平和肝脏病理切片镜下观察结果综合评价肝功能损伤程度。另取各组小鼠肝组织，匀浆后提取RNA，经反转录后行Q-RT-PCR，检测肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10的mRNA水平。【结果】1、肝脏冰冻切片免疫组织化学染色后，于显微镜下发现CLP小鼠肝脏中实质细胞PD-L1表达阳性，假手术组小鼠肝脏未见PD-L1表达。对肝组织匀浆并行Q-RT-PCR后，结果显示CLP术后24h的小鼠肝脏中PD-L1的mRNA表达较假手术组上调5.67倍（P<0.01）。2、CLP术后24h时，CLP组、同型对照组小鼠的外周血血浆ALT和AST较假手术组显著提高（P<0.01），而抗PD-L1组小鼠外周血血浆ALT和AST较CLP组和同型对照组小鼠显著降低（P<0.01）。肝脏病理切片HE染色镜下结果提示，CLP组和同型对照组小鼠的肝脏出现明显的炎性浸润和细胞变性，而抗PD-L1组小鼠的肝脏损伤较CLP组则有所减轻。Q-RT-PCR结果表明，CLP组及同型对照组小鼠肝脏中促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和抗炎细胞因子IL-10的mRNA水平较Sham组显著上调（P<0.01）。抗PD-L1组小鼠肝脏中IL-6、IL-10和TNF-α的mRNA水平较CLP组和同型对照组小鼠显著升高，而IFN-γ的mRNA水平则显著降低（P<0.01）。【结论】CLP致脓毒症小鼠可出现显著的肝脏损伤，表现为血浆ALT和AST水平显著升高，肝脏HE染色示肝脏变形及炎性浸润。脓毒症小鼠肝脏PD-L1表达在蛋白水平和mRNA水平上均显著上调。在体应用抗PD-L1抗体可对CLP致肝损伤的小鼠发挥显著的保护作用，表现为显著降低血浆ALT和AST水平，减轻小鼠肝脏病理损伤程度；应用抗PD-L1抗体可下调脓毒症小鼠肝脏内TNF-α、IL-10和IL-6的mRNA水平，上调IFN-γ的mRNA水平，提示抗PD-L1抗体可抑制肝脏过激免疫反应，减轻CLP脓毒症小鼠因过度炎症反应导致的严重肝脏功能损伤。