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本实验以44只新西兰母兔为实验素材,主要研究兔卵巢表面卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵的不同体外培养条件,以优化兔卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵培养的体系,实验结果如下:1.采用切割法、针刺挤压法收集卵巢表面卵母细胞,检验不同采集方法对收集卵巢卵母细胞数量的影响。结果表明:针刺挤压法的所获得的卵母细胞数(23.63/只)显著高于切割法(16.50/只)(p<0.05)。2.比较添加不同浓度的FSH、LH对兔卵母细胞体外成熟的影响,结果表明: 1 U /mL FSH+2 U/mL LH的成熟率最高,达到46. 62 %,极显著高于对照组(TCM199+10 %FCS)的成熟率(13. 71 %,p<0.01),显著高于高浓度组(10 U /mL FSH+20 U/mL LH)的成熟率(26.83 %,p<0.05)。3.比较了不同的成熟培养时间对卵母细胞成熟率的影响,以成熟培养液培养卵母细胞,分别在成熟培养24 h、30 h、36 h、40 h对部分卵母细胞用透明质酸酶处理后观察第一极体排出率,其余部分加精子观察受精率。培养24 h、30 h、36 h、40 h的成熟率分别为21.92 %、46.62 %、52.77 %、30.71 %,这就表明:成熟时间为30、36 h的成熟率显著高于成熟时间为24、40 h的成熟率(p<0.05)。4.以TCM199+FCS+FSH+LH+E2+丙酮酸钠为基础成熟培养液,分别添加50 ng/mL及100 ng/mL的EGF、10 ng/mL及20 ng/mL的SCF、10 ng/mL及20 ng/mL的LIF,然后比较了EGF、SCF及LIF对卵母细胞成熟率的影响。结果表明:50 ng/mL及100 ng/mL的EGF能显著地提高了卵母细胞成熟率(基础成熟培养液、添加50 ng/mL及100 ng/mL的EGF组的成熟率分别为49.04 %、61.39 %和65.79 %)。SCF对卵母细胞成熟率无明显影响(成熟率分别为54.17 %、50.00 %和45.83 %),而LIF对卵母细胞成熟有明显的抑制作用(成熟率分别为54.19 %、12.50 %和4.17 %)。5.比较了上游法、直接洗涤法和Percoll密度梯度离心法三种精子处理方法对兔精子回收率及卵裂率的影响,三种方法的回收率分别为7.8 %、93.9 %、86.9 %,受精后的卵裂率分别为0 %、39.05 %、54.29 %,结果表明:Percoll密度梯度离心法是一种较理想的精子处理方法。6.比较了常规体外受精与显微注射卵裂率,结果显示,常规体外受精卵裂率(63.97 %)极显著高于显微注射卵裂率(25.65 %)(p<0.01)。7.比较了TCM199+10% FCS和DMEM+10 %FCS对胚胎(取自常规体外受精的2-细胞)发育的影响,结果表明两者之间无显著差异(p>0.05)。8.以TCM199+10 %FCS为基础的受精卵培养液,分别添加一定浓度的维生素C(100μmol/L)及β-巯基乙醇(50μmol/L),然后比较了它们对胚胎(取自常规体外受精的2-细胞)发育的影响,表明结果,100μmol/L的维生素C及50μmol/Lβ-巯基乙醇对胚胎发育无显著影响(p>0.05)。