环腺苷酸对绵羊卵丘-卵母细胞复合体中间隙连接蛋白37表达的影响

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wscmjk
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哺乳动物卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COC)内存在的间隙连接交流(Gap junctional connection,GJC)为卵母细胞成熟过程所需信息交流与营养传递,提供必要支持。间隙连接蛋白37(Connexin 37,Cx37)是卵母细胞分泌的主要间隙连接蛋白之一,对卵子发生与卵泡发育过程有着重要作用。高水平环腺苷酸(Cyclic adenosine monophosphate,c AMP)是维持卵母细胞减数分裂恢复的前提条件。研究发现,卵母细胞内c AMP减少会直接造成卵丘与卵母细胞间GJC的关闭与减数分裂恢复;而只要提升c AMP水平,COC中GJC功能即会得到增强。但是在绵羊COC内c AMP与Cx37蛋白表达调控相关研究,尚未见报道。本研究首先采用免疫组织化学与RT-PCR技术检测了未成熟绵羊COC内Cx37蛋白与基因表达。在无促性腺激素的培养体系中添加环腺苷酸调节剂,利用竞争性ELISA技术探究了绵羊COC内环腺苷酸水平变化的时间效应。随后利用实时荧光定量PCR技术和Western-blot技术分别检测了体外培养10 min时Cx37基因与蛋白表达的情况。最后采用Western-blot技术探究了环腺苷酸对绵羊COC内Cx37表达调控的初步机制。研究结果表明:(1)Cx37蛋白定位于绵羊卵母细胞与卵丘细胞中;GJA4基因在绵羊卵母细胞与卵丘细胞内均有表达。(2)在无促性腺激素培养体系中,Forskolin和IBMX处理组与空白对照组相比,体外培养10 min或1 h,均显著提升绵羊COCs内c AMP水平(P<0.01)。(3)体外培养10 min后,与空白对照组相比,Forskolin和IBMX处理组,均显著提升Cx37基因与蛋白表达(P<0.05)。(4)体外培养10 min或1 h后,添加Forskolin和IBMX组均能明显提升Cx37蛋白表达(P<0.05);与此同时,添加RP-c AMP(一种c AMP特异性竞争性抑制剂),抑制蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)活性,能够抵消c AMP对Cx37蛋白表达的促进作用。综上,本研究认为,在绵羊COCs中,Cx37同时参与了卵母与卵丘细胞以及卵丘与相邻卵丘细胞之间的间隙连接结构形成。c AMP对于绵羊COCs内Cx37蛋白和基因表达,具有正向调节作用且其机制可能与PKA激活有关。本研究探讨了绵羊卵母细胞成熟过程中环腺苷酸参与间隙连接蛋白37表达的初步调节机制,为进一步揭示绵羊卵母细胞成熟机制提供了试验支持。
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