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成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)在人体内分布广泛,主要包括碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)两大类。碱性成纤维细胞生长因子已应用于临床,促进组织损伤及伤口修复。而酸性成纤维细胞生长因子也能诱导伤口附近的组织细胞如血管平滑肌细胞、成纤维细胞、肌纤维母细胞的分裂、增殖,加速胶原纤维的合成,促进皮肤和黏膜创面的愈合。正常情况下,人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)含量很低,有学者利用基因工程技术,将haFGF基因重组进大肠埃希菌质粒中,获得了高效表达生物活性产物的工程菌株,其化学结构、理化性质和生物活性与人体内haFGF完全一致。在本实验中应用现有重组haFGF(rhaFGF)产品进行有关动物创伤愈合的药理学实验,以期为该药的进一步研究提供理论依据。 本文主要从以下三个部分展开论述： 第一部分：rhaFGF对糖尿病大鼠慢性难愈合创面的影响 目的：观察rhaFGF.对糖尿病大鼠慢性难愈合创面的影响。 方法：建立糖尿病大鼠慢性难愈合创面模型,分4组进行实验观察:其中2组分别按90,60AU/cm2的剂量给予rhaFGF,阳性对照组按60AU/cm2的剂量给予rb-bFGF,阴性对照组给予等量基质,采用创面照相和透明膜描记法记录伤后第4,8,14天创面面积;对创面面积的组间差异进行统计学分析。在伤后第8天和第14天,取创面组织,经10％甲醛溶液固定后制片,常规HE染色,观察创面肉芽组织生长与再上皮化变化,评价修复效果。 结果：各组大鼠创面面积随伤后时间的延长逐渐缩小,其中rhaFGF高剂量组(90AU/cm2)和rb-bFGF治疗组(60AU/cm2)大鼠的疗效更显著。组织学检查,可见经 rhaFGF高剂量组(90AU/cm2)和 rb-bFGF治疗组(60AU/cm2)治疗8天后大鼠的创面成纤维细胞生长活跃,数量多,毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于阴性对照组和 rhaFGF治疗量组(60AU/cm2)。伤后第14天,rhaFGF高剂量组(90AU/cm2)和rb-bFGF治疗组(60AU/cm2)的大鼠创面病理切片显示再上皮化明显,治疗效果明显优于阴性对照组和 rhaFGF治疗量组(60AU/cm2)。 结论：rhaFGF.对糖尿病大鼠慢性难愈合创面有促修复作用,可促进创面肉芽组织生长、毛细血管胚芽形成与再上皮化。 第二部分：rhaFGF对糖尿病大鼠慢性难愈合创面的转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 目的：观察rhaFGF对糖尿病大鼠慢性难愈合创面的TGF-β1和VEGF表达的影响,深入探讨rhaFGF在组织修复中的作用机制。 方法：首先建立糖尿病大鼠慢性难愈合创面模型,分四组进行观察,其中2组分别按90,60AU/cm2的剂量给予rhaFGF,阳性对照组按60AU/cm2的剂量给予rb-bFGF,阴性对照组给予等量基质。在伤后第8天和第14天,取创面组织,经10%甲醛溶液固定后制片,采用免疫组化方法检测各组伤后不同时间点创面愈合组织中TGF-β1与VEGF的表达情况。 结果：创面组织中TGF-β1的表达量逐渐增加,其中以rhaFGF高剂量组(90AU/cm2)和rb-bFGF治疗组(60AU/cm2)更为明显。创面组织中VEGF的表达量逐渐减少,但是rhaFGF高剂量组(90AU/cm2)和rb-bFGF治疗组(60AU/cm2)阳性细胞的表达个数仍然显著多于阴性对照组和rhaFGF治疗量组(60AU/cm2)。 结论：rhaFGF可能通过上调糖尿病大鼠创面中TGF-β1和VEGF的表达,从而促进肉芽组织生长和毛细血管胚芽形成使得愈合周期显著缩短。 第三部分：rhaFGF对创面愈合后期的影响 目的：观察rhaFGF对创面愈合后期的影响,深入探讨rhaFGF在组织修复后期中的作用机制。 方法：利用大鼠创面模型,采用免疫组化方法检测伤后不同时间点创面愈合组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达情况;采用羟脯氨酸测试法检测伤口中胶原纤维的含量,并对照观察创面应用rhaFGF后以上各项指标的变化。 结果：创面组织中caspase-3的表达量逐渐增加,外用rhaFGF后第14天和21天的caspase-3表达量显著高于单纯创伤组。伤口中羟脯氨酸的含量逐渐增加,外用rhaFGF后第8天和14天的羟脯氨酸含量显著高于单纯创伤组。 结论：外用rhaFGF在创伤愈合的前期可以促进肉芽组织生长使得愈合周期缩短。在创伤愈合的后期可以直接或间接的促进成纤维细胞的凋亡,维持了细胞增殖与凋亡的平衡。