1、抗对硫磷四价抗体表达载体构建　　 根据抗对硫磷四价抗体基因序列设计对应对引物,用经优化后的PCR反应条件扩增得到抗对硫磷四价抗体基因后经酶切、PCR扩增初步验证及基因测序确认为目的基因后,将其与达载体pTO-T7连接,转化大肠杆菌rigami2(DE3),成功构建抗对硫磷四价抗体表达载体。　　 2、抗对硫磷四价抗体的表达及检测　　 抗对硫磷四价抗体表达载体经IPTG诱导目的基因表达,表达产物经SDS-PAGE检测蛋白分子量和Western Blot特异性鉴定,结果表明,虽然表达产物中仍有包涵体,但与抗体改造前相比,可溶性蛋白含量已得到显著提高,经浓度测定得知目的蛋白浓度为0.29 mg／ml。　　 3、抗对硫磷四价抗体的ELISA反应活性检测　　 改造后的基因工程抗体经纯化后用ELISA方法测定生物学活性,并与实验室保存的单克隆抗体、单链抗体、前期制备的四价抗体相比较,ELISA结果显示该抗体与对硫磷特异结合呈阳性,抗体亲和常数为3.84×108 L／mol,半数抑制浓度为0.50μg／ml,表明该抗体亲和力较好,ELISA检测灵敏度得到显著提高。　　 4.导致包涵体形成的因素很多,目前尚无明确解决的方法,本实验考虑抗体基因序列密码子偏倚性、基因调控序列、诱导条件等方面原因,通过选用合适的表达载体和宿主菌,优化表达条件后提高可溶性蛋白产量,为工程抗体在原核表达系统中实现可溶性表达作出有益探索。