固定金属亲和膜色谱具有可以在较短时间内处理大量的实际样品,低压降,容易扩大化生产等优点,因此在蛋白等生物大分子的分离纯化方面有潜在应用价值。但是与传统的以微球装柱的柱色谱相比,膜色谱比表面积较低,因而对蛋白的吸附容量较低,限制其分离效率的提高。为提高蛋白的吸附量,本文采用超支化方法对膜进行表面改性,通过在表面引入更多的功能基团,增加吸附位点来提高蛋白的吸附量,制备了一种对于金属离子和蛋白都有较高吸附量的超支化固定金属离子亲和膜。同时研究了该改性膜对蛋白的吸附性能,并将其用于含组氨酸标签蛋白的分离纯化。首先通过两步反应在膜表面引入带有氨基的宫能团,接下来将丙烯酸甲酯和乙二胺逐步加入,通过迈克加成反应和酰胺化反应在膜表面形成超支化结构,最后依次与环氧氯丙烷和亚氨基二乙酸反应,再螯合金属离子制备了超支化固定金属离子亲和膜。用FTIR和XPS表征了膜表面的化学组成。溶菌酶被作为模型蛋白来探究蛋白的吸附性能,该改性膜对于溶菌酶的最大吸附量为162 mg/cm3,高于文献报道值。同时探究了溶液pH,离子强度,疏水作用和吸附时间对吸附量的影响。将该改性膜用于蛋清中溶菌酶的纯化,回收率可达到94.3%,比未超支化的固定金属离子亲和膜的回收率提高了50%。最后用本文制备的改性膜从大肠杆菌粗提液中分离和富集含六聚组氨酸标签的天蚕抗菌肽B-人表皮生长因子(CB-EGF)融合蛋白,获得的蛋白纯度较高。所有这些结果证明本文合成的超支化固化金属离子亲和膜在His-tagged蛋白的分离纯化方面有潜在的应用价值。