转Bar基因抗除草剂水稻的旁侧序列鉴定及相关性状评价

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转基因抗除草剂水稻BarKasalath-01和Bar9K29-9-2是由本课题组新获得的转Bar基因抗草铵膦水稻新种质。本研究以上述两种转基因水稻为材料,扩增得到了外源基因插入位点的旁侧序列,建立了转基因水稻BarKasalath-01和Bar9K29-9-2的事件特异性定性PCR检测方法。同时还检测了转基因水稻中Bar基因表达稳定性,及其抗除草剂特性和农艺性状,得到以下主要结论:  1.利用hiTAIL-PCR和LD-PCR方法分别在BarKasalath-01和Bar9K29-9-2中获得了T-DNA右边界旁侧序列,用BLAST(Basic local alignment search tool)与水稻参考基因组数据库进行比对,发现在上述两个转基因水稻株系中,外源基因插入位点分别为水稻基因组第8号染色体第3326720位和第1号染色体第7301129位。根据插入位点的参考基因组序列和T-DNA左边界,设计引物,扩增获得了两个转化体T-DNA左边界旁侧序列。根据左右旁侧序列,建立了转基因水稻BarKasalath-01和Bar9K29-9-2的事件特异性定性PCR检测方法。该方法特异性强、灵敏度高,能够在转基因水稻基因组DNA含量为0.1%的模板中检测出转基因成份。依据旁侧序列,还建立了快速鉴定转基因后代植株基因型的3引物PCR检测方法。  2.用ELISA试剂盒检测转基因水稻BarKasalath-01和Bar9K29-9-2中PAT蛋白含量发现,在两个转基因株系中均能检测到PAT蛋白,并且叶片中含量最高,二者均超过40μg/g,叶鞘次之,蛋白含量分别为11.61μg/g、14.37μg/g,茎最低,蛋白含量分别为10.59μg/g、8.34μg/g。  3.在含不同浓度草铵膦的1/2MS培养基上进行种子发芽实验,结果表明,转基因水稻BarKasalath-01和Bar9K29-9-2能够在含18 mg/L草铵膦的培养基上正常发芽,表现出对草铵膦良好的抗性。  4.对转基因水稻和非转基因水稻进行农艺性状考察,结果发现转基因水稻的重要农艺性状与非转基因水稻无显著差异。
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