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绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引发的绵羊肺腺瘤病(OPA),是绵羊的一种慢性进行性传染性肺脏肿瘤疾病。JSRV具有与其他逆转录病毒相似的结构和基因组,基因组包含了编码病毒衣壳结构蛋白的gag基因,编码天冬氨酸蛋白酶(PR)的pro基因,编码逆转录酶(RT)和整合酶(IN)的pol基因以及编码存在与病毒粒子表面的囊膜蛋白(Env)的env基因。其中囊膜蛋白主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内,是主要的致癌蛋白。为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的功能,从而揭示JSRV的致癌机制。本研究以自然感染的OPA的病肺组织为原料提取总RNA并反转录成cDNA,构建含完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exISRV-env)的重组质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env,并通过PCR、酶切和核酸测序方法鉴定其正确性。采用脂质体转染技术将重组质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测Env的表达,利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测囊膜蛋白Env表达对NIH3T3细胞增殖的影响。PCR、限制性内切酶鉴定和核酸序列测序结果显示成功构建了含exJSRV-env的重组真核表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env;以重组质粒瞬时转染NIH3T3细胞,检测到囊膜蛋白的表达；CCK-8检测结果显示转染pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的细胞的增殖活力极显著高于对照组(空白及阴性)细胞(P<0.01),转染pcDNA4/myc-His空质粒的细胞与未转染的细胞之间差异不显著(P>0.05)；平板克隆实验结果显示：统计各组细胞形成的克隆数,经SPSS软件分析，转染pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的NIH3T3细胞的克隆形成率显著高于转染pcDNA4/myc-His细胞和未转染的细胞(P‘<0.05),转染pcDNA4/myc-His空质粒的细胞与未转染的细胞之间无显著差异(P>0.05)。Western blot方法检测EGFR的表达,应用Image J软件进行灰度分析,结果显示转染pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的NIH3T3细胞的EGFR的表达极显著高于对照组细胞(P<0.01),转染pcDNA4/myc-Hi s空质粒的细胞与未转染的细胞之间差异不显著(P>0.05)。本研究表明绵羊肺腺瘤囊膜蛋白可以通过促进NIH3T3细胞的增殖及克隆形成,并检测到绵羊肺腺瘤囊膜蛋白可以可以促进EGFR的表达,为进一步研究绵羊肺腺瘤囊膜蛋白的致瘤机制奠定基础。