1.研究背景：　　本研究主要分为两部分，第一部分为文献研究，系统综述了放射性肺纤维化的中西医研究概况，放射性肺纤维化是西医病名，主要由累计放射剂量超过肺泡细胞耐受剂量而产生，发病机制多样，目前较为公认的为“细胞因子瀑布学说”，其形成过程大概分为肺泡免疫炎性反应、肺实质损伤、纤维化形成三个阶段。中医学中并无纤维化病名，相关论述散在记载于“咳嗽”、“肺痿”、“肺胀”“肺痹”等证。多因虚起病，肺肾亏损，痰瘀互结，虚实夹杂，历代医家根据其演变特点辨证分期、分型论治，屡获不错效果。Notch信号通路是近期发现与纤维化密切相关的通路，通过参与多种生物体内炎性反应、免疫反应、氧化应激等途径影响纤维化进程。故本研究将从Notch信号通路的角度探求中医药防治RPF的作用机制。　　第二部分为实验研究，通过建立RPF大鼠模型，采用“养阴性肺活血”经验方，运用病理、免疫组化、流式细胞术等研究方法，从Notch角度观察养阴清肺活血方对RPF大鼠病理形态、Notch受体与配体在组织及免疫细胞中的表达。结果表明，养阴清肺活血方能够有效改善大鼠炎症及纤维化程度，其作用机制可能是通过下调Notch信号上游受体配体实现的。提示该方可通过干预调控Notch信号防治放射性肺纤维化。　　总之，笔者从文献和实验两个方面对中药养阴清肺活血方防治RPF进行相关探讨，并初步阐明干预Notch信号通路的作用机制。其研究结果不仅希望为中医药防治放射性肺纤维化提供理论依据，也为今后进一步的研究提供了思路。　　2.研究目的：　　通过观察养阴清肺活血方对放射性肺纤维化大鼠一般情况、肺组织病理形态、肺脏指数、局部肺组织及外周血T细胞中Notch1、Jagged1调节的影响，探讨该方对放射性肺纤维化病变的治疗机制，为临床用药提供理论依据。　　3.研究方法：　　3.1 放射性肺纤维化大鼠模型的建立　　大鼠常规饲养1周后称重，将大鼠用10％的水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定于自备木架，充分暴露胸部，6MV-X线加速器单次全胸照射16Gy，照射范围上至两腋窝、下至胸骨剑突(约为3.0cm×4.5cm)，源靶距为100cm，剂量率250cGy/min，在相对较短时间内建立大鼠模型，空白组大鼠在同等条件下肺部假照射0Gy。　　3.2 动物给药方案　　各组于照射后第1天开始灌胃给药，逐日1次，持续至取材。每周固定时间称重一次并按体重变动调整灌胃剂量，按1ml/100g药量给药。空白组:生理盐水，1次/d灌胃;模型组:生理盐水，1次/d灌胃;激素组:1-2周1.25mg/(kg·d)醋酸泼尼松注龙射液腹腔注射，第3周0.625mg/(kg·d)醋酸泼尼松注龙射液腹腔注射，5-8周生理盐水;中药组:1-4周肺炎期中药9.7g/(kg·d)中药药液，1次/d灌胃，5-8周时改为纤维化期中药9.7g/(kg·d)，1次/日灌胃;联合用药组:1-2周肺炎期中药+激素药液(9.7g中药+1.25mg泼尼松龙注射液/(kg·d))，1次/d灌胃或者腹腔注射;3周改为中药+激素药液(9.7g中药+0.625mg泼尼松龙注射液/(kg·d))，1次/d灌胃或者腹腔注射;5-8周时改为纤维化期中药(9.7g/(kg·d))，1次/d灌胃。　　3.3 肺组织病理观察及指标检测　　灌胃8周后取材，观察大鼠一般活动情况;收集肺脏组织检测肺脏系数并行HE、Masson染色，光镜下观察病理形态学变化;根据Szapiel等的半定量方法确定其分级情况，免疫组化检测肺组织Notch1表达含量。应用Image Pro-Plus6.0软件计算图片中黄色区域的累积光密度和黄色区域的面积。　　平均光密度=IOD(Sum)/Area(Sum)。　　3.4 T细胞Notch信号上游分子的表达。　　3.4.1 腹主动脉采血，免疫磁珠分选提取外周血T细胞。　　3.4.2 采用流式细胞术检测外周血T细胞Notch1受体表达。　　3.4.3 通过RT-PCR技术检测T细胞中Notch1、Jagged1的表达。　　3.4.4 应用Western blot技术检测T细胞中Notch1、NICD、Jagged1的表达。　　4.研究结果　　4.1 一般情况观察　　联合用药组大鼠与其他造模组比较，精神状态、体重、以及皮毛、大便等一般情况较好。模型组大鼠死亡3只，照射部位毛色晦暗、质地枯槁、甚至脱落，大便稀溏臭秽，甚至开始脱毛以及皮肤溃烂。与模型组相比，联合用药组病变较轻微。中药组整体情况较激素组稍好，大便干硬或稀溏症状出现较晚，症状也较轻。　　4.2 肺脏肉眼观察及肺系数检测　　中药组、联合用药组与模型组比较，大鼠肺脏外观组织肿胀溃烂程度较轻，颜色较浅。空白组大鼠肺湿重改变不明显，中药组及联合用药组体重变化不明显，肺湿重略有增加。照射后各组大鼠肺系数与空白组比较均明显增大，差异明显，联合用药组肺系数明显低于模型组，下降趋势明显，与模型组相比，中药组、联合用药组肺系数降低，联合用药组更为明显，激素组肺系数则无明显统计学差异。　　4.3 病理学观察　　染色后，空白组大鼠肺组织结构清晰，易于识别，支气管壁完整，平滑肌厚度正常，未见炎性细胞等病理变化。照射后大鼠表现出不同水平炎性病变，肺泡壁增厚，炎性渗出水肿明显，支气管壁增厚，毛细血管及肺间质充血，肺间质及肺泡腔内可见大量巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞，并可见纤维样渗出，纤维样结缔组织增生增多，出现实区。给药8周后，中药组、激素组、联合用药组肺组织肿大、出血、渗出等炎性病理改变均比模型组有不同程度的改善，联合用药组除支气管平滑肌厚度不同程度降低外，炎细胞浸润也明显减轻，呈中轻度肺炎改变，优于激素组。　　4.4 指标检测　　RPF模型大鼠肺组织及外周血T细胞中存在Notch1、Jagged1表达失调的现象，免疫组化结果显示，空白组在主支气管、血管周围、肺间质组织中只看到淡黄色颗粒和条纹，只有极少数深黄色或棕色条纹。照射8周后模型组Notch1明显上调，表达较强，在支气管及肺泡壁周围多见棕黄色条纹及颗粒，Notch1表达量显著高于空白组。流式细胞术也检测到T细胞中Notch1受体组间差异明显，RT-PCR及Western-blot显示中药养阴清肺活血方、糖皮质激素以及两药联合应用可以调节Notch信号受体、配体在细胞核内外的含量。联合用药组较之单药效果较好。　　研究结论：　　中药养阴清肺活血方可明显改善RPF大鼠肺组织炎症和纤维化水平，有效防止肺纤维化的进程。其作用机制可能与下调Notch1、NICD、Jagged1表达有关，表明该方可通过调节Notch信号通路起到防治作用。