【摘 要】
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随着纳米医学的进步与发展,众多纳米载体被广泛应用于肿瘤的基因治疗或药物治疗。然而,现有的基因/药物递送载体存在制备复杂、成本较高、靶向性低等缺陷,亟需解决。本论文中,我们构建了基于聚多巴胺的双靶向纳米基因递送平台以及基于纳米氧化石墨烯的具有p H响应性的药物递送平台以解决上述问题。开展两项具体工作内容如下:（1）结合睡美人转座子的功能化PDA/DEX-PEI@HA纳米颗粒递送CRISPR/Cas9
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随着纳米医学的进步与发展,众多纳米载体被广泛应用于肿瘤的基因治疗或药物治疗。然而,现有的基因/药物递送载体存在制备复杂、成本较高、靶向性低等缺陷,亟需解决。本论文中,我们构建了基于聚多巴胺的双靶向纳米基因递送平台以及基于纳米氧化石墨烯的具有p H响应性的药物递送平台以解决上述问题。开展两项具体工作内容如下:（1）结合睡美人转座子的功能化PDA/DEX-PEI@HA纳米颗粒递送CRISPR/Cas9系统用于基因治疗。在这项工作中,我们将CRISPR/Cas9系统与睡美人转座子（SB）进行重组,获得了重组质粒p T2Sp Cas9。同时,以聚多巴胺（PDA）为载体,聚乙烯亚胺（PEI）为基因吸附位点,透明质酸（HA）为靶头,地塞米松（DEX）为核定位信号（NLS）构建PDA/DEXPEI@HA（PDPH）纳米颗粒用于CRISPR/Cas9的靶向递送。粒度分析结果显示,PDPH/p T2Sp Cas9-Nanog的粒径为125 nm左右。在细胞水平上,PDPH能有效地将p DNA递送到细胞内并深入细胞核。与PEI相比,PDPH的细胞毒性可以忽略不计。细胞实验结果显示,转染PDPH/p T2Sp Cas9-Nanog/SB11后,He La细胞中的Nanog蛋白被敲除,肿瘤细胞的增殖和迁移明显减少。PCR结果证实了睡美人转座子成功将CRISPR/Cas9系统整合至细胞基因组内。（2）腙键连接的DOX-PEG-FA非共价修饰纳米氧化石墨烯用于靶向药物递送。在这项工作中,我们制备了DOX-hyd-PEG-FA聚合物。通过π-π共轭及疏水作用,将聚合物负载于NGO表面得到NGO@DOX-hyd-PEG-FA纳米药物。纳米药物中的PEG可显著提高NGO的生物相容性。FA通过靶向肿瘤细胞表面的叶酸受体提高纳米药物的内化率。在肿瘤的弱酸性环境中,纳米药物中的腙键被分解,造成DOX在肿瘤部位的大量释放。研究结果表明,NGO@DOX-hyd-PEG-FA的粒径为150 nm左右,载药量超过100%。对NGO@DOX-hyd-PEG-FA的药物释放行为、细胞摄取能力、细胞内分布情况以及体外细胞毒性进行考察,结果证明NGO@DOX-hyd-PEG-FA纳米药物对肿瘤细胞具有主动靶向性,在肿瘤的微酸性环境下能够大量释放抗癌药物,有效杀伤肿瘤细胞的同时降低对正常细胞的毒性。
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