【摘 要】
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目的:探讨TRPM7在胆管癌中的表达及其与预后的相关性;探讨TRPM7通道在RBE细胞生长中的作用及TRPM7siRNA对RBE细胞生长的影响。方法:应用免疫组化SP法检测TRPM7在49例胆管癌、
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目的:探讨TRPM7在胆管癌中的表达及其与预后的相关性;探讨TRPM7通道在RBE细胞生长中的作用及TRPM7siRNA对RBE细胞生长的影响。方法:应用免疫组化SP法检测TRPM7在49例胆管癌、7例胆管良性病变组织和36例肿瘤周围正常胆管组织的表达情况,分析其与胆管癌临床病理特点及预后的关系。体外培养胆管癌RBE细胞并分为3组:空白对照组(不加任何转染试剂)、空载体腺病毒转染组(没加任何转染试剂的腺病毒)、和实验组(转染TRPM7siRNA腺病毒),分别于24h、48h、72h后,观察RBE细胞的转染效果;RT-PCR、Western blot分别检测各组细胞48h时TRPM7的mRNA及蛋白水平的表达;MTT比色法测定RBE细胞增殖能力;流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和凋亡;细胞划痕法检测RBE细胞运动能力;Transwell实验检测RBE细胞的侵袭、迁移能力。结果:胆管癌组织中TRPM7表达阳性率为77.6%(38/49),高于其在胆管良性病变组织的表达阳性率(0,0/7)及正常胆管组织中的表达阳性率(2.8%,1/36)(P<0.05)。TRPM7蛋白的表达与胆管癌的TNM分期、淋巴结转移和脏器转移有关(P<0.05),但与患者的年龄、性别、部位、肿瘤分化程度及肝炎无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现TRPM7阳性表达患者的生存期低于TRPM7阴性表达的患者(P<0.05)。Cox多因素回归分析显示,TRPM7的表达水平与生存预后显著相关(P<0.05),是影响预后的独立危险因素(OR=3.635,P<0.05)。倒置显微镜下可观察到腺病毒成功转染RBE细胞。RT-PCR、Western blot检测结果转染TRPM7siRNA实验组TRPM7mRNA及TRPM7蛋白的表达水平均明显低于空白对照组及空载体组,差异有显著统计学意义(P<0.01),而空白对照组与空载体组间无统计学差异(P>0.05)。MTT法检测结果实验组RBE细胞增殖能力低于空白对照组及空载体组,差异有统计学意义(P<0.05),而空白对照组与空载体组间无统计学差异(P>0.05),实验组内各时间点生长抑制率也有统计学差异(P<0.05)。流式细胞仪测定实验组RBE细胞的细胞周期G0/G1期所占比例高于其他两组,而凋亡率明显低于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验检测结果实验组RBE细胞的迁移间距差明显低于空白对照组及空载体组,差异有显著统计学意义(P<0.01),而空载体组与空白对照组细胞相比,差别无统计学意义(P>0.05)。Transwell实验检测结果实验组RBE细胞的侵袭、迁移细胞数明显低于空白对照组及空载体组,差异有显著统计学意义(P<0.01),而空白对照组与空载体组间无统计学差异(P>0.05)。结论:1.TRPM7在人的正常胆管组织几乎不表达,而在胆管癌组织中大量表达,且在胆管癌的浸润转移中发挥重要作用,不仅是影响胆管癌患者预后的重要危险因素,而且是独立的危险因素。2.TRPM7在胆管癌RBE细胞中的表达丰富,干扰TRPM7的表达能阻滞胆管癌细胞的生长周期,诱导胆管癌细胞的凋亡,提示TRPM7可能是促进胆管癌细胞生长必要的生长相关分子。3.TRPM7siRNA腺病毒靶向沉默TRPM7的表达显著抑制了 RBE细胞的增殖能力及侵袭迁移能力。4.TRPM7有望成为预测胆管癌发展和侵袭转移的生物学指标,可能是胆管癌基因治疗的潜在新靶点。
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