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目的:探究重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者CD8~+T细胞中组蛋白H3乙酰化修饰相关酶的表达及其与SAA患者骨髓衰竭的相关性,深入探索组蛋白H3乙酰化在CD8~+T细胞异常激活中的机制,为SAA的治疗提供潜在靶点。方法:1.共纳入20例SAA初治患者、18例SAA缓解患者及22名正常对照,通过MACS分选外周血CD8~+T细胞,应用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法比较不同组别组蛋白乙酰化酶P300和CBP表达水平的差异,并进行P300和CBP表达水平的相关性分析。同时,检测了三组CD8~+T细胞的IFN-γ表达水平,并将P300/CBP分别和IFN-γ表达水平进行相关性分析。此外,我们将SAA患者P300和CBP水平分别与外周血指标进行相关性分析。2.共纳入3例SAA初治患者、3名正常对照,通过MACS分选CD8~+T细胞,应用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)技术比较SAA患者和正常对照CD8~+T细胞中组蛋白H3乙酰化(H3ac)水平。3.通过Ch IP-seq技术在全基因组范围内分析8例SAA初治患者、8例SAA复查患者和7名正常对照组CD8~+T细胞组蛋白H3乙酰化状态的改变。结果:1.SAA初治患者CD8~+T细胞中P300 m RNA表达水平显著高于正常对照组(3.667±0.862 vs 1.300±0.202,P<0.05),也高于R-SAA患者(3.667±0.862 vs1.524±0.304,P>0.05);R-SAA患者P300 m RNA表达水平无差别于正常对照组(1.524±0.304 vs 1.300±0.202,P>0.05)。SAA初治患者CD8~+T细胞CBP m RNA表达水平显著高于R-SAA患者(2.742±0.422 vs 2.119±0.615,P<0.05)和对照组(2.742±0.422 vs 1.178±0.137,P<0.05),而R-SAA患者CBP m RNA表达水平无差别于正常对照组(2.119±0.615 vs 1.178±0.137,P>0.05)。SAA患者CD8~+T细胞中P300和CBP表达水平呈显著正相关(r=0.5626,P<0.01)。SAA初治患者CD8~+T细胞中IFN-γm RNA表达水平显著高于正常对照组(5.124±1.320 vs 1.622±0.319,P<0.05),也高于R-SAA患者(5.124±1.320 vs 1.890±0.495,P>0.05),R-SAA患者IFN-γm RNA表达水平无差别于正常对照组(1.890±0.495 vs 1.622±0.319,P>0.05)。SAA患者CD8~+T细胞P300和CBP表达量分别与IFN-γ表达量呈显著正相关(r=0.4085,P<0.05;r=0.4603,P<0.01)。SAA患者P300表达水平与外周血白细胞(r=-0.3622,P<0.05)、中性粒细胞绝对值(r=-0.3216,P<0.05)、网织红细胞绝对值(r=-0.3603,P<0.05)呈明显的负相关。SAA患者CBP表达水平与白细胞(r=-0.4048,P<0.05)、中性粒细胞绝对值(r=-0.3470,P<0.05)、淋巴细胞绝对值(r=-0.3714,P<0.05)、网织红细胞百分比(r=-0.3446,P<0.05)、网织红细胞绝对值(r=-0.3882,P<0.05)呈显著负相关。2.Western Blot结果显示SAA患者CD8~+T细胞组蛋白H3乙酰化(H3ac)水平较正常对照升高。3.通过CHIP-seq技术,我们找出了5195个SAA初治组CD8~+T细胞中较正常对照组上调的H3ac结合基因,以及2326个下调的H3ac结合基因。对5195个上调的H3ac结合基因进行KEGG分析发现其主要富集在MAPK信号通路、Ras信号通路以及Rap1信号通路。结论:1.SAA患者CD8~+T细胞组蛋白乙酰化酶P300和CBP表达量均较正常对照组升高,SAA患者CD8~+T细胞IFN-γ表达量较正常对照组升高。2.SAA患者CD8~+T细胞P300和CBP表达量呈显著正相关,并且CD8~+T细胞P300和CBP表达量分别与IFN-γ表达量呈显著正相关。3.SAA患者CD8~+T细胞P300和CBP表达水平与血象指标密切相关,即P300和CBP表达水平越高,SAA患者外周血血象越低,病情严重程度越重。4.SAA患者CD8~+T细胞组蛋白H3乙酰化水平较正常对照组升高。5.SAA患者CD8~+T细胞组蛋白H3乙酰化水平的升高可能通过MAPK信号通路、Ras信号通路以及Rap1信号通路参与CD8~+T细胞的激活。