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猪瘟(CSF)是一种由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种猪群疫病,每年对养猪业造成巨大损失。为了解2016-2017年度山东省CSF流行清况,本文对2016-2017年度CSF抗原、抗体进行检测。2016年共检测疑似CSF感染组织样品2297份,其中检测到阳性结果样本数为230份,阳性率为10.01%。2017年共检测疑似CSF感染组织样品784份,其中检测到阳性结果样本数为67份,阳性率为8.55%。2016年共检测血液抗体样品9713份,其中CSF阳性抗体样本数为7744份,阳性率为79.73%。2017年共检测血液抗体样品6887份,其中CSF阳性抗体样本数为5839份,阳性率为84.78%。检测结果显示,2017年相较于2016年抗原感染率下降,抗体阳性率上升。对2016-2017年送检样品中的抗原阳性病料,根据地域和时间差异进行毒株分离,最终分离到8株CSFV野毒株,将所有分离毒株E2基因进行序列遗传进化分析,结果显示8株野毒株均为2.1d基因亚群,表明目前在山东省内广泛、持续性的存在2.1d基因亚群CSFV。同时,本研究对野毒株SDWF 2016进行了全基因组序列测定。单克隆抗体因为其特异性和敏感性良好等优点,在CSFV的诊断以及分子生物学研究方面有重要作用。本文根据分离毒株SDWF 2016的E2基因主要抗原区段,构建质粒进行原核表达蛋白免疫小鼠制备CSFV单抗。得到2株效价1:80000的IgGI型腹水单抗2-77、4-35,稀释800倍用于IFA试验,可以很好地鉴别CSFV的感染。单抗的成功制备,为实验室鉴定CSFV及后续试验的开展提供了基础。普通细菌载体质粒存在将自身DNA与宿主染色体整合的潜在危险,微环DNA载体(Minicircle DNA Vectors)可通过位点特异重组酶对载体质粒进行切割重组,并通过宿主体内特异性酶的作用,形成含有目的基因及表达所需原件的微环DNA质粒,缩短了载体质粒片段长度,减小了整合的潜在危险。本试验根据分离毒株SDWF 2016基因组序列,构建猪瘟病毒E2基因去跨膜区(dTMR)的微环DNA载体质粒pMC-E2d-PP、pMC-E2d-MC,用其对小鼠进行免疫,分析其体液免疫水平和细胞免疫水平。结果显示在免疫后第5周,试验组pMC-E2d-MC抗体水平呈现阳性,流式细胞术检测CSFV特异性CD8+T细胞,及细胞因子IFN-γ、IL-4 增值率分别为 10.67%,1.98%,0.722%,表明 CSFV 微环 DNA 质粒可以引起体液免疫应答和细胞免疫应答。本研究为CSFV新型疫苗的研发提供了新思路和基础数据。