【摘 要】
：
研究背景与目的癌症已经发展成为全球性的公共卫生问题,严重危害人类的生命和健康。传统的癌症治疗方法包括手术、放疗和化疗,但难以清除所有的癌细胞,存在易复发、副作用大、耐药性等问题。近年来,以过继性T细胞疗法和免疫检查点抑制剂为代表的癌症免疫疗法给部分血液癌症患者带来了希望,但同时需要复杂的体外工程、耗时、费用高等缺点限制了其在临床中的应用。另外由于实体肿瘤存在高度异质性或肿瘤特异性抗原缺乏等特点,导
【基金项目】
：
国家杰出青年科学基金（82025024）； 国家自然科学基金项目（82072382）； 国家自然科学基金项目（82272424）；
论文部分内容阅读
研究背景与目的癌症已经发展成为全球性的公共卫生问题,严重危害人类的生命和健康。传统的癌症治疗方法包括手术、放疗和化疗,但难以清除所有的癌细胞,存在易复发、副作用大、耐药性等问题。近年来,以过继性T细胞疗法和免疫检查点抑制剂为代表的癌症免疫疗法给部分血液癌症患者带来了希望,但同时需要复杂的体外工程、耗时、费用高等缺点限制了其在临床中的应用。另外由于实体肿瘤存在高度异质性或肿瘤特异性抗原缺乏等特点,导致免疫治疗响应率偏低。如何增强免疫细胞识别和结合癌细胞的能力对基于细胞的免疫疗法的成功非常重要。开发基于适配体靶向的免疫治疗策略能高亲和力、特异性识别癌细胞,特别是双特异性适配体,能与癌细胞和免疫T细胞结合并募集免疫细胞到肿瘤部位以增强免疫系统的抗肿瘤活性。另外,基于DNA纳米技术杂交链式反应开发的免疫治疗策略的成功为免疫治疗提供了新的思路。总的来说,建立一种简单有效的基于适配体和DNA纳米技术的细胞免疫疗法可能是一种很有前途的治疗癌症的方法。在此,我们通过设计靶向高表达PD-L1癌细胞的适配体和靶向T细胞CD62L的LD201t1适配体,利用杂交链式反应组装成纳米线双特异性适配体,以识别和粘附癌细胞的PD-L1,阻断免疫检查点同时募集结合更多的免疫T细胞,从而增强免疫细胞-癌细胞相互作用。研究方法1.纳米线双特异性适配体自组装体系的构建:1.1设计适配体Apt-PD-L1与Apt-LD201t1及杂交链式反应中的发夹核酸序列H1、H2,并通过Oligo Analyzer以及NUPACK网站对它们的结构分别进行自由能计算和稳定性评估。1.2利用PAGE电泳技术对NWBi-Apts自组装体系的反应结果进行分析,验证Bi-apts及NWBi-Apts自组装反应的成功组装与触发。1.3利用PAGE电泳技术对10%FBS孵育后的单个适体及NWBi-Apts的稳定性进行分析。2.纳米线双特异性适配体用于增强免疫细胞-癌细胞的相互作用:2.1通过共聚焦显微镜及流式细胞仪研究Apt-LD201t1和Apt-PD-L1的细胞靶向能力,验证适配体结合靶细胞的可行性。2.2设计带有荧光基团的Apt-PD-L1-FAM组装NWBi-Apts结合不同细胞系如人乳腺癌MDA-MB-231细胞、人宫颈癌细胞系Hela细胞、人支气管上皮系16HBE细胞进行实验,验证NWBi-Apts结合癌细胞的特异性。2.3验证不同反应缓冲液、反应时间、适配体浓度对NWBi-Apts结合靶细胞的影响,最终选择最佳的反应条件。2.4在最佳的反应条件下,用荧光共聚焦显微镜和流式细胞仪探讨NWBi-Apts是否能介导MDA-MB-231细胞与Jurkat细胞结合产生细胞连接复合物,并评估其结合效能。2.5使用CCK-8细胞增殖比色法试剂盒对NWBi-Apts的生物相容性进行评估。2.6用荧光共聚焦显微镜探讨NWBi-Apts在不同E/T（1:1、3:1）时,介导MDA-MB-231细胞与小鼠脾细胞的结合效能。结果1.我们通过理论的分析后进行了核酸电泳分析,最终得出结论:自组装NWBi-Apts有着稳定的二级结构,可在10%FBS生物环境中保持稳定24 h不被核酸酶降解。2.所设计的适配体能靶向结合MDA-MB-231细胞和Jurkat细胞;并且构建的NWBi-Apts能特异性靶向高表达PD-L1的癌细胞;最佳反应条件下,能介导MDA-MB-231细胞和Jurkat细胞形成更多的细胞连接复合物;有着良好的生物相容性;在E/T为3:1时介导MDA-MB-231细胞与小鼠脾细胞形成更高阶的细胞集群,产生更高的结合效能。结论在这项工作中,我们建立了一种基于适配体和杂交链式反应自组装技术构建多价NWBi-Apts,能在生物环境中保持稳定,具有良好的生物相容性,能识别和粘附癌细胞的PD-L1,阻断免疫检查点同时募集结合更多的免疫T细胞。这项技术操作简便,并且将来可能通过改变不同的适配体即可识别粘附不同的癌细胞,为发展基于细胞的免疫疗法提供了新的思路。
其他文献
目的:本研究的目的是（1）基于大样本人群水平的数据库鉴别出骨关节炎相关的核心肠道菌群,并验证这些肠道菌群是否介导了代谢综合征及其组分与骨关节炎之间的联系;（2）验证服用二甲双胍是否与伴有糖尿病或/和肥胖的膝骨关节炎患者全膝关节置换风险及膝关节疼痛程度的降低有关。方法:第一部分,肠道菌群介导代谢综合征及其组分与骨关节炎之间的联系研究,我们首先从“广东省肠道微生物项目”（GGMP,n=7009）数据库
随着人口老龄化的增长,全世界的癌症发病率和死亡率正在迅速增长,人们越来越重视癌症的治疗。化疗是当前癌症治疗中最常用的方法之一。但传统的化疗药物存在特异性差,全身毒性强,血液清除快,在体液中的溶解度差等问题,从而制约了化疗药物对肿瘤的治疗效果。随着纳米医学的发展,将纳米粒子用作抗癌药物递送载体可以精确地靶向肿瘤组织、控制抗癌药物的释放以及降低抗癌药物的全身毒性。在本论文中,我们合成了含有环糊精单元的
在实现中国式现代化的进程中，碳达峰的提出，既是可持续发展战略，同时也为各行业在新时代的创新发展指明了方向。历史遗留矿山的治理是我国碳达峰和生态文明建设的重要组成部分。历史遗留矿山为更好地落实这一目标，提出了绿色治理的理念。本文在阐述碳达峰目标及绿色治理的基础上，对碳达峰目标下我国遗留矿山绿色治理的发展现状和趋势进行分析，探究绿色治理的常见的技术，以期为我国遗留矿山绿色治理碳达峰目标的实现，提供参考
目的:探讨血清β-hCG比值（48 h/0h）及内膜厚度预测不明位置妊娠（PUL）患者妊娠结局的临床价值,从而为指导临床下一步诊疗决策提供参考。方法:对2020年期间来我院就诊的PUL孕妇进行前瞻性临床观察,所有孕妇均行经阴道超声测量内膜厚度,观察血清hCG水平变化（0小时和48小时）,计算血清β-hCG比值（48h/0h）,随访至妊娠结局明确（自然流产、宫内妊娠和异位妊娠）。对三种妊娠结局的β-
研究背景:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是人类消化系统中最常见的恶性肿瘤之一,由于早期患者临床症状较为隐匿,初诊时多已出现肿瘤转移。手术及放化疗是目前治疗结直肠癌的主要方法,然而由于手术切除具有创伤性、危险性及局限性,化学疗法存在全身性毒副作用且易出现耐药,放射治疗也可导致局部正常组织损伤等缺点,结直肠癌的治疗效果及预后仍不理想。近年来,传统中草药及其有效成分的抗癌、调节免
背景:帕金森病（PD）是第二个最常见的神经退行性疾病,全世界有600多万人患有PD。PD主要病理改变是神经元内以α-Synuclein（α-Syn）聚集为主的路易小体形成,以及中脑黑质致密部多巴胺能（DA）神经元的进行性丢失,线粒体功能障碍、氧化应激和自噬功能障碍参与了 PD的发病[1]。在遗传性和散发性帕金森病中,线粒体复合体Ⅰ（MCI）功能障碍是DA神经元凋亡和丢失的一个重要原因,而PINK1
“三全育人”的提出，对心理教育而言具有十分重大的意义。对于大学生的心理教育而言，需要家庭、校园、社会的全员关心与努力，无论是在家庭教育、校园教育还是社会工作的全过程中都必须提供对应的心理服务，在大学教育层面上也必须在教育教学的多维度上全面进行。
我国力争分别于2030年、2060年前实现碳达峰和碳中和,而能源结构转型作为实现碳达峰碳中和目标的关键,已经成为统筹国内国际两个大局、引导我国能源结构转型、经济高质量发展的重要组成部分。公共政策作为政府的行为载体,已经成为政府实现一定时期工作目标的重要手段和工具,但由于我国公共政策的顶层设计仍不完善、能源安全与经济发展矛盾突出,以及政策执行偏差等客观情况的存在,导致各级政府、企业、公众等利益主体产
背景与目的甲亢伴肝损害是甲状腺功能亢进常见并发症之一,临床表现为肝功能异常、黄疸、肝脏肿大等症状。目前国内用药以抗甲状腺药（ATDs）为主,而ATDs治疗过程中会造成肝损害,因此,临床急需抗甲亢及护肝药物。因宁片是南方医科大学南方医院院内制剂,在临床上作为治疗甲亢伴肝损害药物使用多年,疗效确切,具有很好的抗甲亢及护肝作用,发展潜力巨大。然而因宁片中君药昆明山海棠药材在中药复方制剂中的定性鉴别研究尚