1α，25(OH)2D3是维生素D的活性形式，以往对其在钙磷平衡及骨代谢中作用的研究较多，目前发现它对体内的免疫系统也具有重要的调节作用。人类的免疫相关性疾病主要包括以Th1优势为主的自身免疫疾病和Th2亢进的变态反应性疾病，对1Q，25(0H)2D3在自身免疫性疾病中的作用人们已取得一定的共识，而对其在变态反应性疾病中的效应研究较少。本课题通过检测脐血250HD3浓度和1α，25(OH)2D3在体外不同条件下对脐血单个核细胞胞生成细胞因子的影响，探讨新生儿出生时的维生素D状态和1α，25(OH)2D3对脐血Th细胞分化的作用以及在变态反应性疾病中所起的作用。 第一部分脐血250HD3与单个核细胞胞内细胞因子的水平 目的：了解新生儿的维生素D水平，推测产妇的维生素D储备状态；同时评估新生儿早期的Th细胞极化状态。 方法：选取2004年9～10月间在本院分娩的32例新生儿脐血，用放免法检测血浆250HD3水平。同期，另选9例正常分娩新生儿的脐血，抗凝分离单个核细胞(CBMC)，用流式细胞术检测CD4+T细胞产生的IFNY和IL-4比例。 结果：250HD3检测值为53．0±24．8nmol／L，数据呈正态分布(p=0．575)。其中正常组(≥40nmol／L)20例，异常组(＜40nmol／L)12例，2例为严重低下(≤25nmol／L)。 CBMC内CD4+细胞的IFNγ和IL-4检测结果显示，CD4+IFNγ+细胞的比例范围是O．41～6．45％，CD4+IL-4+细胞的比例范围是0．08～1．59％。两组数值呈正态分布(p值为0．786和0．908)，两者无明显相关性(r=0．089，p＞0．05)。 结论：依据普通成人的标准，从脐血的250HD3水平推测，目前妊娠期维生素D不足的现象仍较为普遍，而维生素D水平低下对妊娠妇女和新生儿都会造成不利影响。由此提示本地对防治维生素D缺乏和相应的监测工作存在不足。脐血Th细胞的检测结果，提示新生儿出生时的Thl细胞和Th2细胞分化状态表现为Th1优势的特征，个体间差异较大，Thl和Th2细胞比例间无明显相关性。 第二部分1α，25(OH)2D3对脐血Th1／Th2分化的影响 目的：研究1α，25(OH)2D3在不同条件下，影响脐血Th细胞分化的趋势。 方法：将分离获得的9例脐血单个核细胞(CBMC)加入PHA后分为四组，置于四种不同的环境中培养，包括1α，25(OH)2D3，1α，25(OH)2D3+IL-4和IL-4以及空白培养液。应用流式细胞术，在不同的培养时间点1天、3天和7天时，检测CD4+IFN-γ+细胞和CD4+IL-4+比例。比较相同时间不同条件下，1α，25(OH)2D3干预的组间差异和1α，25(OH)2D3干预对细胞分化的影响随时间的变化趋势。 结果：各时间点的检测结果显示，空白组CD4+IFNγ+细胞和CD4+IL-4+细胞比例均逐渐增多。单纯1α，25(OH)2D3干预时，与对照组相比CD4+IFNγ+细胞的生成受到抑制，此效应至第3天时更明显，均值分别为1．12％和6．0％(t=4．998，p＜0．001)，而对CD4+IL-4+细胞比例则起促进作用，均值分别为1．73％和0．92％(t=5．822，p＜0．001)，但这一促进并未呈持续表现，而是逐渐减弱，至第7天已出现抑制样的特征(均值分别为0．46％和1．15％，t=5．941，O＜0．001)。同时加入IL-4和1α，25(0H)2D3组，与单加IL-4的对照组相比，IFNγ+细胞的生成也受到抑制，但抑制作用呈减弱趋势，第7天时呈现促进样变化，无组间差异(43％和2．5％，t=1．854，p＞0．05)；对生成CD4+IL-4+细胞作用，第1天与对照组相比已呈抑制(1．04％和1．24％，t=2．877，p<0．05)，并且随作用时间延续，其抑制作用逐步增强。1α，25(OH)2D3组的3个时间点的各检测结果显示组间方差齐性(p＞0．05)，CD4+IFNγ+细胞和CD4+IL-4+细胞的各自差异有显著意义(F=8．382和7．932，p＜0．01)。组内比较，显示CD4+IFNγ+细胞的差异随时间变化有统计学意义(p＜0．01)；CD4+IL-4’的改变第3天起有显著差异(p＜0．01)。1Qα，25(OH)2D3+IL-4组的结果方差亦呈齐性(p＞0．05)，CD4+IFNY’细胞和CD4+IL-4+细胞的各自差异显著(F=5．178和7．162，p=0．014和0．004)。组内比较，CD4+IFNγ+细胞和CD4+IL-4+细胞的变化均从第3天有显著差异(p＜0．01)。 结论：1α，25(OH)2D3对Thl具有抑制作用，作用强度未随时间加强，在IL-4共同作用时，最终表现为促进效应；而对Th2的作用则为先促进后抑制，在IL-4并存的条件下，抑制效应逐渐增强。