【摘 要】
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目的:通过分析检测脓毒血症儿童和健康儿童的NLRC4蛋白及其mRNA的表达水平,和分析LPS刺激诱导RAW264.7巨噬细胞NLRC4表达、细胞因子的分泌及信号通路抑制剂的使用,探究NLRC4在儿童脓毒血症外周血中的表达水平及体外作用机制。方法:1.实验中使用Western Blot法检测NLRC4蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验检测IL-1β和IL-18的表达水平,半定量逆转录聚合酶链反应技术（
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目的:通过分析检测脓毒血症儿童和健康儿童的NLRC4蛋白及其mRNA的表达水平,和分析LPS刺激诱导RAW264.7巨噬细胞NLRC4表达、细胞因子的分泌及信号通路抑制剂的使用,探究NLRC4在儿童脓毒血症外周血中的表达水平及体外作用机制。方法:1.实验中使用Western Blot法检测NLRC4蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验检测IL-1β和IL-18的表达水平,半定量逆转录聚合酶链反应技术（RT-qPCR）测定NLRC4mRNA 表达量。2.收集临床上诊断为脓毒血症患儿和健康儿童的外周血,设为脓毒血症实验组和健康儿童对照组,分别检测NLRC4的蛋白表达水平和mRNA的水平。3.应用不同浓度的LPS诱导RAW264.7巨噬细胞一定时间后,检测NLRC4的蛋白表达水平。4.应用一定浓度的LPS处理RAW264.7巨噬细胞不同时间后,检测NLRC4的蛋白表达水平。5.应用NLRC4 siRNA转染RAW264.7巨噬细胞,再用一定浓度的LPS处理一定的时间,检测NLRC4的蛋白、IL-1β和IL-18的表达水平。6.应用p38、ERK和JNK三种抑制剂阻断MAPK信号通路后,持续使用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞,检测NLRC4的蛋白、p-p38、p-ERK和p-JNK的表达水平。结果:1.通过对47例脓毒血症患儿和41例健康儿童的NLRC4蛋白的表达水平和mRNA水平的检测并进行统计学分析后结果表明:脓毒血症患儿的NLRC4蛋白和mRNA表达水平均明显高于健康儿童（P＜0.05）。2.与对照组相比,随着LPS的浓度增大,RAW264.7巨噬细胞表达的NLRC4蛋白越高,且具有统计学意义（P＜0.05）。3.与对照组相比,随着LPS的处理时间不短延长时,随之细胞表达NLRC4蛋白水平越高,且具有统计学意义（P＜0.05）。4.经NLRC4 siRNA转染后的RAW264.7巨噬细胞,相对于LPS+Scr组而言,NLRC4的表达水平显著降低（P＜0.05）。相反,细胞因子IL-1β和IL-18的分泌水平升高（P＜0.05）。5.p38、ERK和JNK三种信号通路阻断后,NLRC4组较对照组表达明显下降。存在统计学意义（P＜0.05）,且信号通路的磷酸化蛋白表达同样降低,且具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.NLRC4在脓毒血症患儿血液中表达增高,对脓毒血症的诊断可能具有指导意义。2.LPS可以诱导NLRC4表达增加,并与刺激时间和LPS浓度存在相关性。3.NLRC4在细胞水平上具有抑制细胞炎症因子过度产生的作用。4.MAPK信号通路参与了 LPS诱导NLRC4表达的调控。
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