番茄核质转运蛋白SlTRN1的初步分析

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核质转运是真核细胞完成生命活动所必须的基础功能。Importin β型细胞核转运受体介导了众多具有特定生物学功能的底物蛋白入核,在生物体的整个生命活动过程中都起到重要的调控作用。在本论文中,克隆得到了番茄SlTRN1,通过氨基酸序列比对,发现作为Importin β型转运蛋白,番茄SlTRN1具有较为保守的氨基酸序列,与拟南芥(Arabidopsis thalina)、杨树(Populus trichocarpa)、柳橙(Citrussinensis)、克莱门柚(Citrus clementina)、可可(Theobroma cacao)、李子(Prunusmume)和蓖麻(Ricinus communis)中的TRN1均具有70%以上的相似性。将番茄SlTRN1转入拟南芥中表达,可以恢复sic1-1突变体表型,例如增加株高、降低分支数目、增长节间、恢复叶片大小等。通过观察SlTRN1-EGFP的荧光,发现在拟南芥根细胞中,番茄SlTRN1的亚细胞定位主要在细胞核中,同时在细胞质中也有存在。通过酵母双杂交验证,发现SlTRN1可以与部分AtTRN1的底物产生互作,包括 AtlG56280、AtlG61170、At2G24790、At2G39730、At3G44310、At3G50330和 At4G39140。而 AtTRN1 的转运底物 At5G24930、At5G14040 和 At4G38710与SlTRN1是没有互作的。说明番茄SlTRN1是通过弥补AtTRN1的部分核质转运功能,使得sicl-1突变体的表型得到恢复。通过克隆出AtTRN1的转运底物蛋白在番茄中的8个同源物,利用酵母双杂交验证,发现其中 5 个(LOC101262262、LOC101255184、LOC101252594、NM001247087和LOC101055547)可以和SlTRN1相互作用,同时还都拥有核定位信号。说明在番茄中SlTRN1对转运底物的选择是相对保守的,可以转运与拟南芥中相似的底物入核。不同种类的植物可能采取了相似的方式,利用TRN1进行核质转运,TRN1很有可能在植物的进化中维持了功能的保守性。
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