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目的：探讨SB431542(SB)通过DNMT1调控CLDN6基因DNA甲基化及其表达的作用机制，揭示CLDN6通过EMT对乳腺癌细胞转移的调控作用。方法：采用RT-PCR和Western blot技术检测乳腺上皮细胞HBL-100、乳腺癌细胞MCF-7和SKBR-3中SMAD2和CLDN6的表达；采用Western blot法筛选SMADs抑制剂SB调控p-SMAD2和CLDN6表达的最适作用浓度与时间；用SB处理乳腺癌细胞，采用Western blot技术检测SMAD3和p-SMAD3的表达；采用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR，MSP)技术检测CLDN6基因DNA甲基化PCR产物的表达；采用亚硫酸氢盐测序（Bisulfite Sequencing PCR，BSP）法检测SKBR-3细胞中CLDN6启动子区甲基化位点；采用RT-PCR和Western blot技术检测DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase1，DNMT1）的表达，用DNMT1活性检测试剂盒检测DNMT1的活性；采用染色质免疫沉淀（ChromatinImmunoprecipitation assay，ChIP）技术检测DNMT1与CLDN6启动子区的结合；检测单层细胞跨上皮电阻；采用划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力；采用RT-PCR和Western blot技术检测上皮标志物E-cadherin和间质标志物N-cadherin、Vimentin和SNAIL的表达；采用细胞免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin及CLDN6的表达。利用RNAi技术沉默SB处理组的CLDN6基因后，检测单层细胞跨上皮电阻；采用划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力；采用RT-PCR和Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及SNAIL的表达；采用细胞免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin及CLDN6的表达。结果：乳腺癌细胞MCF-7和SKBR-3细胞中CLDN6表达明显低于正常乳腺上皮细胞HBL-100，SMAD2表达明显高于HBL-100细胞；SB处理乳腺癌细胞对p-SMAD2和CLDN6表达影响的最适作用浓度与时间为10μM和24h，且具有时间和浓度依赖性；用10μM SB处理乳腺癌细胞24h，SMAD3总蛋白的表达不变，p-SMAD3的表达明显降低；CLDN6启动子区甲基化PCR产物减少，CpG位点甲基化概率减少；DNMT1表达下调，DNMT1活性降低，DNMT1与CLDN6启动子区的结合减少；细胞跨上皮电阻增加，迁移和侵袭能力降低，E-cadherin表达增高，N-cadherin、Vimentin及SNAIL的表达降低；沉默SB处理组CLDN6，细胞跨上皮电阻减小，迁移和侵袭能力增强，E-cadherin表达降低，N-cadherin、Vimentin及SNAIL的表达增高。结论：1．乳腺癌细胞MCF-7和SKBR-3中，SB下调DNMT1的表达，抑制DNMT1性并抑制DNMT1与CLDN6启动子的结合，降低CLDN6的甲基化水平，上CLDN6的表达。2．CLDN6通过逆转EMT抑制乳腺癌细胞的转移。