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目的该课题是利用小鼠胆管结扎(BDL)模型探讨脱水穿心莲内酯(DA)对小鼠胆汁淤积诱导的肝纤维化的保护作用;同时,通过体外培养人LX-2细胞探讨DA在肝纤维化过程中的作用机制。方法动物实验:40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组:羟甲基纤维素(CMC)+假手术(sham)组、DA+sham组、CMC+BDL组和DA+BDL组,每组10只小鼠。BDL组小鼠进行胆总管双重结扎并中间离断,sham组小鼠进行假手术,胆总管只穿线不结扎。DA+sham组和DA+BDL组小鼠给予DA灌胃(100mg/kg)给药,每日一次,同时CMC+sham组和CMC+BDL组小鼠给予灌服相同剂量的CMC。连续灌胃5d后各组小鼠进行相应的手术,术后12h继续灌胃给予每只小鼠相应组别的药物治疗。连续7d后处死小鼠收集血清和肝脏标本,做以下检测:丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和总胆汁酸(TBA)试剂盒检测血清中ALT、TBIL和TBA浓度;小鼠肝脏石蜡切片HE染色,镜下观察肝组织病理形态变化,天狼猩红染色观察肝纤维化程度;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝组织中肝纤维化相关基因的相对表达量,包括转化生长因子-β(TGF-β)、I型胶原α1(Col1a1)mRNA表达;Western blot检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的相对表达量。体外细胞实验:体外培养人LX-2细胞,使用TGF-β激活LX-2细胞。分为空白溶剂(DMSO)对照组、DA组(20μM/L)、TGF-β组(2ng/ml)、低剂量DA(5μM/L)+TGF-β(2ng/ml)组、中剂量DA(10μM/L)+TGF-β(2ng/ml)组和高剂量DA(20μM/L)+TGF-β(2ng/ml)组。qRT-PCR检测各组细胞中Col1a1mRNA相对表达量。Western blot检测各组细胞中α-SMA的蛋白相对表达量。结果动物实验:在小鼠实验中,我们发现CMC+BDL组小鼠血清中ALT、TBIL和TBA的水平显著上升(P<0.01),但给予DA后,这些生化指标的水平显著降低(P<0.01),肝损伤明显减轻;肝脏形态学分析显示,HE染色可见,与CMC+sham组相比,CMC+BDL组小鼠肝小叶结构被破坏,肝索断裂,在汇管区有大量的炎性细胞的浸润,胆管壁明显增厚,并出现明显的增生,有大量的弥漫性、点状样肝细胞坏死灶;与CMC+BDL组相比,DA+BDL组小鼠病理损伤明显改善,炎性细胞浸润明显减少,坏死灶明显减少。天狼猩红染色结果显示,与CMC+sham组相比,CMC+BDL组小鼠肝组织中汇管区周围出现大量胶原纤维沉积;与CMC+BDL组相比,DA+BDL组小鼠肝组织汇管区周围胶原纤维沉积明显减少,纤维程度减轻(P<0.01)。同时qRT-PCR和Western blot结果显示,与CMC+sham组比较,CMC+BDL组小鼠肝组织中TGF-β、Col1a1 mRNA和α-SMA蛋白表达水平升高;DA明显降低了小鼠肝组织中BDL诱导的TGF-β、Col1a1 mRNA和α-SMA蛋白表达水平的升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。体外细胞实验:qRT-PCR和Western blot结果显示DA治疗能够显著抑制TGF-β激活的人LX-2细胞中Col1a1 mRNA和α-SMA蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论DA对BDL诱导的小鼠肝损伤具有保护作用;DA可能通过抑制纤维化相关因子的表达,进而减少肝星状细胞(HSC)的活化,达到抗纤维化的作用。