非离子表面活性剂果糖酯的酶法合成研究

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糖酯是一类重要的非离子型表面活性剂,具有无毒、无刺激和可生物降解等优点,在食品、化妆品、医药领域中有广泛用途和良好发展前景。酶法合成糖酯与化学法合成相比具有反应条件温和、选择性强的优点,反应过程中无副反应发生,产品易于纯化,且不会有焦化变色的现象发生。 本文建立了果糖酯薄层色谱定性分析方法。薄层色谱的最佳条件为:以薄层层析硅胶G为固定相,甲苯—乙酸乙酯—甲醇—水(10:5:4.5:0.2,v/v/v/v)为展开剂,α-萘酚—硫酸喷雾显色,测得棕榈酸果糖单酯、棕榈酸果糖双酯的Rf值分别为0.20和0.56。 建立了果糖酯的高效液相色谱—蒸发光散射检测器(HPLC—ELSD)定量分析方法,本方法具有灵敏度高,干扰小的特点,文献上尚未见有报道。色谱条件:固定相为反相Prevail C18柱,流动相为60%A+40%B(v/v),其中A为99%乙酸乙酯+1%水(v/v),B为75%甲醇+25%水(v/v),流速为1mL/min,柱温为30℃,ELSD检测器。在该色谱条件下,建立了产物的标准曲线,并进行了准确度和精密度试验:棕榈酸果糖单酯标准曲线回归方程:M=2×10-6A-2.3924,R2=0.9948,线性范围5μg—30μg,RSD为2.01%,回收率96.4%~98.6%:棕榈酸果糖双酯标准曲线回归方程:M=1×10-6A-2.0152,R2=0.9984,线性范围5μg—40μg,RSD为1.62%,回收率是95.0%~98.3%。 溶剂的选择和水含量的控制是酶法合成糖酯的关键,本文确定了甲乙酮溶剂结合分子筛吸附水的研究方案。甲乙酮是一种良好的反应媒介,对底物有一定的溶解能力,同时又可保持酶的稳定性;分子筛可以快速吸附甲乙酮中的水分,使反应体系中的水分保持在一个较低含量水平,推动反应平衡向酯生成的方向移动,提高产物浓度。 本文以甲乙酮为溶剂考察了酶法合成果糖酯反应中水含量、酶浓度、底物及其配比、反应温度等因素对反应的影响,发现果糖的转化率达95%时,分子筛用量为85g/L溶剂;脂肪酶的最适烷基供体是硬脂酸;硬脂酸/果糖的摩尔比例
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