生物标志物的筛选与检测为癌症的早期诊断带来了希望,而免疫分析法因其操作简便、灵敏度高等特点已被运用到生物标志物的检测中。迄今为止,已发展了成千上万种基于不同原理的免疫分析法,但各有利弊。不断改进旧方法、尝试新的检测原理、开发新的免疫分析方法是十分必要的。纳米材料在光学、催化、磁学、电学等方面表现出优良性质,因此在免疫分析中拥有巨大的发挥空间。在此背景下,本文引入纳米材料,实现信号放大,结合痕量铁检测手段,构建了以下三种生物标志物phospho-p53(S392)检测方法:1、基于磁纳米材料构建的免疫分析法用于phospho-p53(S392)的检测Fe304纳米材料具有稳定性好、对环境耐受强等特点,并且富含铁元素,本身便是铁信号的放大。铁蛋白(ferritin)被称为“水溶性蛋白”,其内壳中富含铁元素,将铁蛋白包裹在Fe304纳米材料周围,增强其水溶性的同时将铁信号进一步放大。对phospho-p53(S392)进行夹心反应,用合成的Fe3O4-ferritin复合物标记检测抗体。反应完成后酸解释放标记物中铁元素,静置,待其完全转变为三价铁离子,利用痕量铁催化褪色光度法进行检测,从而构建了一种新型夹心免疫分析法,实现了对phospho-p53(S392)的检测,该方法在抗原浓度为0.1 ng/mL～7.5 ng/mL范围内呈现良好线性,检测限为0.08 ng/mL(S/N=3)。2、基于铁蛋白构建的免疫分析法用于phospho-p53(S392)的检测合成簇状物用作标记物也是免疫分析中常用的一种信号放大手段。铁蛋白内壳富含铁元素,将铁蛋白联结成簇,即可实现信号的放大。以此簇状物为标记,将铁蛋白簇内部铁元素酸解释放,并用催化褪色光度法检测,构建了一种新型夹心免疫分析法,实现了对phospho-p53(S392)的检测,该方法在抗原浓度为0.5 ng/mL～10 ng/mL范围内呈现良好线性,检测限为0.1 ng/mL(S/N=3)。3、基于亚铁离子痕量检测法构建的光学免疫分析法用于phospho-p53(S392)的检测邻二氮菲痕量铁检测法相对于催化褪色光度法,具有操作更加简便,适用pH范围广等优点。因此在本章中,依旧采用Fe304-ferritin复合物作为标记物,将释放的铁离子加入还原剂还原成亚铁离子,采用邻二氮菲法进行铁信号检测。从而构建夹心免疫分析法,实现对phospho-p53(S392)的检测,该方法在抗原浓度为0.5 ng/mL～12 ng/mL范围内呈现良好线性,检测限为0.2 ng/mL(S/N=3)。