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高等植物的肌动蛋白是由多基因家族编码的,包含多个异型体成员。豌豆的肌动蛋白家族至少存在了三类异型体PEAcⅠ,PEAcⅡ和PEAcⅢ。同一类型的异型体在不同的组织器官中,以及在同一组织的不同生育时期的mRNA水平存在着差异。 本工作除了对豌豆中肌动蛋白异型体在不同组织器官中的表达状况进行了研究外,还分析了在高浓度(300mM)NaCl和乙酰胆碱(10mM)的刺激下,PEAcⅠ和PEAcⅢ的表达。 PEAcⅠ,PEAcⅡ和PEAcⅢ这三类异型体的基因在编码区差别较小,但是非编码区序列几乎没有同源性。本实验以总RNA为模板,18S rRNA为内标,进行半定量RT-PCR。以3’UTR为特异性探针对PCR产物进行Southern杂交。利用薄层色谱的方法对Southern杂交结果进行定量扫描,分析不同样品间PEAcⅠ和PEAcⅢ mRNA的相对含量。 结果显示,在即将开放的豌豆花中,PEAcⅠ和PEAcⅢ在不同的部位mRNA水平存在着很大的差异。幼嫩茎中PEAcⅠmRNA水平远远高于在成熟茎中的mRNA水平(江元清2002),而茎中PEAcⅢ的mRNA水平在成熟的茎中略高,60天时是2天时的1.2倍;在卷须中,PEAcⅠ的mRNA水平在整个发育时期内变化很小(江元清2002),而PEAcⅢ则在14天时mRNA水平达到高峰,随后回落到7天时的水平,并在成熟的卷须中保持稳定。以上研究结果表明,PEAcⅠ和PEAcⅢ在不同的组织器官中的转录受到调控的模式可能是不同的。 对豌豆的10天幼苗进行10mM乙酰胆碱和300mM NaCl处理时,PEAcⅠ和PEAcⅢ的mRNA水平都在短时间内大幅增加,且在24小时内PEAcⅠ和PEAcⅢ mRNA水平都出现了波动现象。用300mM NaCl处理时,PEAcⅠ的mRNA水平升高到原来的10倍,PEAcⅢ只升高到了原来的2.7倍。用10mM乙酰胆碱处理时,PEAcⅢ与PEAcⅠ相比,在短时间内mRNA水平升高的更多,0.5小时内PEAcⅢ升高到了对照的2.7倍,而PEAcⅠ只升高到了原始的1.2倍;在24小时内,PEAcⅢ mRNA水平波动的频率比PEAcⅠ更高,PEAcⅢ在一天之内出现了三个峰,PEAcⅠ只出现了两个峰。 从以上研究结果推测,PEAcⅠ和PEAcⅢ在转录水平上都参与了植物对于乙酰胆碱和高浓度NaCl刺激的应答,PEAcⅠ和PEAcⅢ在不同的外界刺激下的反应程度不同。但是在乙酰胆碱和高浓度NaCl刺激的条件下,PEAcⅠ和PEAcⅢ在转录水平的调控机制还有待进一步研究。