【摘 要】
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目的:本研究通过建立SH-SY5Y及U251细胞氧糖剥夺/复糖复氧（oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,模拟脑梗死后神经细胞缺血再灌注损伤,探讨mir-423-5p与OGD/R后神经细胞凋亡间的关系。方法:1、运用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,q PCR）检测mir-423-5p在SH-SY5Y
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目的:本研究通过建立SH-SY5Y及U251细胞氧糖剥夺/复糖复氧（oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,模拟脑梗死后神经细胞缺血再灌注损伤,探讨mir-423-5p与OGD/R后神经细胞凋亡间的关系。方法:1、运用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,q PCR）检测mir-423-5p在SH-SY5Y细胞和U251细胞的表达情况,确定mir-423-5p在正常培养的SH-SY5Y细胞和U251细胞中均为稳定表达,可进行后续实验。2、探讨OGD/R模型的构建条件,以低氧诱导因子-1α（Hypoxia-ind ucible factor1-1α,HIF-1α）作为缺氧评价指标,运用q PCR检测HIF-1α的相对表达量,确定最佳缺氧时间为3h。3、将细胞分为对照组、OGD3h/0h组、OGD3h/12h组、OGD3h/24h组,运用q PCR检测各组中mir-423-5p的相对表达量,并运用Western blot（WB）法检测凋亡蛋白caspase-3、PARP、剪切的PARP（cleav ed-PARP,c-PARP）的表达量,分析mir-423-5p与凋亡蛋白间表达量变化的相关性。结果:1、与对照组相比,缺氧1h、2h、3h组SH-SY5Y细胞的HIF-1αmRNA表达水平差异均有统计学意义（P＜0.05）,在缺氧1h组及缺氧2h组之间,SH-SY5Y细胞的HIF-1αmRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,伴随着细胞缺氧时间的进一步延长,缺氧3h组HIF-1αmRNA表达水平相对于缺氧1h及2h组明显增加,差异有统计学意义（P＜0.0001）,故确定OGD/R建模时缺氧时间为3h。2、与对照组比较,SH-SY5Y细胞中OGD3H/ROh组及OGD3H/R24h组的mir-423-5p mRNA的相对表达量差异无统计学意义（P＞0.05）,OGD3H/R12h组mir-423-5p mRNA的表达量差异有统计学意义（P＜0.05）。U251细胞中与对照组比较,OGD3H/ROh组、OGD3H/R12h及OGD3H/R24h组的mir-423-5p mRNA的表达量差异均无统计学意义（P＞0.05）。3、caspase-3蛋白在各组间的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）;在SH-SY5Y细胞中,PARP蛋白OGD/R 0h、12h、24h组的表达较对照组升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,c-PARP的表达在对照组与OGD/R 12h组之间存在显著差异（P＜0.05）,在复氧12h时表达上调,且c-PARP在OGD/R 12h组与OGD/R 0h、24h组间的表达差异也有统计学意义（P＜0.05）,其余各组间均无显著差异表达（P＞0.05）。在U251细胞中,caspase-3、PARP、c-PARP蛋白在各组间的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。4、对SH-SY5Y细胞mir-423-5p与c-PARP的表达量进行皮尔逊相关系数的计算,得相关系数ρx,y=-0.674（P＜0.05）,ρ为负数,表示两者存在负相关,且ρx,y在0.6-0.8之间,表示两者存在强相关。结论:mir-423-5p可能与OGD/R后神经细胞凋亡相关,并且表现为抑制凋亡的作用。
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