目前,由于人类认识水平的不足和技术手段的限制,使得自然界的微生物中99%以上的微生物还难以利用纯培养技术获得分离和培养。然而,获得纯培养菌株是微生物生态学研究的基础。因此,如何提高微生物的可培养性,开发利用这99%的未培养微生物已经成为国内外的一个热点。本实验采用四种不同类型的培养基(LB培养基、土颗粒LB培养基、WSA培养基、土颗粒WSA培养基)对水田、林地、菜地3种土壤样品中的细菌进行培养并分时段计数。以培养获得的纯培养细菌菌体为模板进行细菌16S rDNA的扩增,用限制性内切酶HhaⅠ和Rsa I酶切PCR产物,对酶切图谱进行分型,研究了不同培养基类型对土壤细菌多样性的影响,试图寻找一种可以获得更多细菌培养数量,更多细菌多样性的培养方法。通过对实验结果的分析,可以得到以下结论：第一,延长培养时间可以增加平板培养的细菌数量,但对于不同类型的培养基而言,延长培养时间可增加平板培养细菌数量的效果却有所差异。在菜地土壤样品中,LB培养基在培养144小时后相比较培养48小时后细菌数量增加了1.46倍,而同样的时间内,土颗粒LB培养基细菌数量增加了2.78倍,WSA培养基细菌数量增加了6.33倍,土颗粒WSA培养基增加了8.69倍。另外两种土壤也呈现相同的趋势,即：LB培养基上细菌菌落出现早,但是增长慢,96小时后增长趋势几乎停止；土颗粒WSA培养基则是增长最快的,培养96小时后仍然有大量新的菌落出现。第二,降低培养基营养,可以提高微生物可培养性。本实验中所使用的3种土壤样品经过4种不同类型的培养基培养出的细菌,经PCR-RFLP分析计算得出Shannon-Wiener指数、Simpson指数以及Margalef指数。发现低营养成分培养基培养获得的细菌多样性较高。第三,以土颗粒水代替常规去离子水配制的培养基在培养土壤细菌中,不但可以获得更多的细菌培养数量,而且可以获得更多的细菌培养类型。以菜地土壤为例,利用土颗粒LB培养基培养144h后,共获得8.23×107个CFU,是LB培养基的2.46倍；利用土颗粒WSA培养基培养144h后,共获得6.01×107个CFU,是WSA培养基的2.11倍。比较LB培养基和土颗粒LB培养基,WSA和土颗粒WSA培养基分离培养的菜地土壤样品中的细菌多样性可以发现,其Shannon-Wiener指数、Simpson指数以及Margalef指数都是土颗粒水配制成的培养基较高,而常规培养基较低。这一点,从不同培养基的细菌种系型丰度趋势线中也可以清晰地看出。通过实验结果计算了三种土壤样品的Jaccard指数。结果发现,菜地土壤样品四种培养基之间的Jaccard指数为24.31%,林地土壤样品为12.500%,水稻田样品仅为9.14%。Jaccard指数越小则细菌群落相似性越小,表明只有极少数的土壤细菌能够在不同的环境条件下生长。绝大部分可培养的细菌需要适宜的培养基类型,因此,在培养分离环境微生物方面,培养基的选择就显得尤为重要。