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本研究从山定子(Malus baccata(L.)Borkh)中成功得到两个新的NAC类胁迫应答因子,根据与其它植物的NAC基因的同源性,将这两个应答因子分别命名为MbNAC25和MbNAC29。通过测序发现MbNAC25和MbNAC29的开放阅读框均为1122bp,在使用DNAMAN 8.0软件将MbNAC25和MbNAC29的基因序列翻译后发现,MbNAC25和MbNAC29基因负责编码373个氨基酸,二者都含有一个NAC结构域。预测MbNAC25和MbNAC29的蛋白质理论分子质量分别为41.488 kDa和41.985 kDa,理论等电点pI分别为8.70和9.10,平均亲水系数分别为-0.684和-0.579,这表明了两个蛋白都是亲水性蛋白。亚细胞定位的结果表明MbNAC25和MbNAC29蛋白均定位在细胞核上。利用MEGA 5.0软件构建MbNAC25和MbNAC29蛋白与其它物种NAC蛋白的系统进化树,结果显示MbNAC25和MbNAC29都与苹果(Malus domestica)的同源性最高。半定量PCR结果显示,MbNAC25和MbNAC29基因的表达在山定子的不同部位中具有特异性,在使用正常的Hoagland培养液培养时(0 h),MbNAC25在新叶和茎中的表达较高,而MbNAC29在新叶和老叶中的表达较高。在逆境胁迫中,MbNAC25和MbNAC29基因在新叶和根中表达量都表现出先增强后减弱的趋势,在低温处理时,两个基因在新叶中3 h时表达量达到最高,根中12 h达到最高;在盐处理中MbNAC25和MbNAC29基因在新叶中在12 h时达到最高,根中在6 h时达到最高;干旱处理中MbNAC25和MbNAC29在新叶中24 h时达到峰值,根中在12 h时达到最高;高温处理中两个基因在新叶中12 h时达到最高,根中在24 h时达到最高。实时荧光定量PCR结果显示,在正常的Hoagland营养液培中(0 h),MbNAC25基因在新叶中的表达量最高,其次分别是茎、老叶、根;而MbNAC29基因的表达量由高到低分别为新叶、老叶、根和茎。在低温(4℃)、盐胁迫(200 mmol/L~–11 NaCl)、干旱(15%PEG)和高温(38℃)的处理中,MbNAC25和MbNAC29基因在新叶中的表达量呈现出先增强后减弱的趋势,在低温、高盐和干旱处理中MbNAC25和MbNAC29基因的表达量分别在4 h、12 h和24 h时达到最大值,而在高温处理中,两个基因分别在24 h和12 h达到峰值。MbNAC25和MbNAC29基因在根中的表达量同样呈现出先增强后减弱的趋势,在低温、高盐、干旱和高温处理中MbNAC25和MbNAC29基因的表达量分别在12 h、6 h、12 h和24 h时达到最大。构建MbNAC25和MbNAC29基因的超表达载体,通过农杆菌介导法侵染转化野生型拟南芥,最终得到转MbNAC25和MbNAC29基因拟南芥。经过低温胁迫鉴定(-4℃),野生型拟南芥出现明显的萎蔫现象,而转MbNAC25和MbNAC29基因拟南芥表现正常,即转基因拟南芥的抗冻能力极显著高于野生型;在盐胁迫条件下,野生型拟南芥表现出明显的黄化现象,而转基因拟南芥的黄化现象不明显,MbNAC25和MbNAC29基因提高了拟南芥的抗盐碱能力。在低温和盐胁迫下转MbNAC25和MbNAC29基因拟南芥除MDA之外,其他的生理指标诸如叶绿素含量,脯氨酸含量,SOD、POD和CAT的活性都显著高于野生型拟南芥。综上所述,过表达MbNAC25和MbNAC29基因可显著增强拟南芥的抗寒性和耐盐性。