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目的探讨CYP3A4、CYP3A5、CYP2E1基因多态性对急性缺血性脑卒中患者丁苯酞稳态血药浓度的影响,同时观察基因多态性与丁苯酞治疗AIS患者临床有效性的关联性。方法1.HPLC-Orbitrap法检测急性缺血性脑卒中患者丁苯酞稳态血药浓度建立高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱仪（HPLC-Orbitrap）对急性缺血性脑卒中患者血浆中丁苯酞进行定量检测,血浆样品预处理采用蛋白沉淀法;色谱柱:Thermo Hypersil GOLD LC columns C18（100mm×2.10mm,1.7μm）,流动相:甲醇-水（80:20）,采用等度洗脱,流速:0.3m L·min-1,进样量:10μL,检测总运行时间:5min;MS采用电喷雾正离子源ESI﹢和静电场轨道阱质量分析器采集,定量分析监测的离子对:m/z 191.11→173.10（丁苯酞）、m/z 285.08→222.11（地西泮）。通过以上方法测定急性缺血性脑卒中患者丁苯酞稳态血药浓度,利用Xcalibur、SPSS软件计算血药浓度并进行统计分析。2.CYP3A4、CYP3A5、CYP2E1基因多态性与急性缺血性脑卒中患者丁苯酞稳态血药浓度的相关性选择2019年3月到2019年10月联勤保障部队第九四〇医院神经内科符合纳入标准和排除标准的急性缺血性脑卒中患者。按要求对接受丁苯酞治疗的入组患者采用HPLC-Orbitrap法测定稳态谷浓度,通过Hi-SNP中高通量基因分型技术进行测序。检测入组患者外周血单核苷酸多态性（SNP）,包括:CYP3A4:*1G、*4、*5、*18、*19、*22;CYP3A5:*3、*4;CYP2E1:*5B、*2。根据受试者SNP基因多态性分型结果分组,利用SPSS17.0统计分析软件分析携带不同基因型受试者与丁苯酞稳态谷值血药浓度变化是否具有相关性。3.CYP3A4、CYP3A5、CYP2E1基因多态性与急性缺血性脑卒中患者丁苯酞临床有效性的相关性通过Hi-SNP中高通量基因分型技术对接受丁苯酞治疗的急性缺血性脑卒中患者进行测序,检测符合纳入标准和排除标准患者外周血CYP3A4、CYP3A5、CYP2E1基因多态性,根据人体内血药浓度检测结果的高低分为快代谢组和慢代谢组。疗效指标:NBP稳态血浆总抗氧化能力T-AOC水平和随访接受丁苯酞续贯治疗90天后受试者RANKIN改良量表（m RS）。利用SPSS17.0分析不同基因型受试者NBP临床疗效。结果1.NBP标准曲线回归方程:Y=-12261.6+235971X,r=0.9973,0.025-2.5μg·m L-1范围内线性关系良好,定量下限（LLOQ）为5ng·m L-1;回收率和基质效应考察结果:NBP在浓度高、中、低(1800、1000、10μg·m L-1)提取回收率分别为97.23%、100.82%、94.32%,RSD分别为8.68%、3.78%、5.19%;基质效应分别为101.55%、106.99%、105.08%,RSD分别为6.32%、4.96%、7.60%;精密度和准确度考察结果:丁苯酞高、中、低浓度,日内、日间RE均小于±15%,日内与日间RSD均在10%以内;稳定性考察结果:室温下放置6h、-20℃反复冻融3次、-80℃冻存1月、自动进样器放置12h条件下,RSD在0.29%-9.29%范围内、RE值小于±15%;计算受试者丁苯酞平均稳态血药浓度为0.488±0.524μg·m L-1。2.符合本研究入组标准的受试者共69例。本研究中69例患者CYP3A4*1G、CYP3A5*3、CYP2E1*5B等位基因频率为22.46%、24.64%、17.39%。CYP3A4*1G携带CC型患者丁苯酞稳态血药浓度为0.57±0.58μg·m L-1,TC型为0.32±0.35μg·m L-1,TT型为0.031μg·m L-1。与CC型相比,TC型血药浓度显著降低（P<0.05）;CYP3A5*3携带CC型患者丁苯酞稳态血药浓度为0.60±0.58μg·m L-1,TC型为0.31±0.33μg·m L-1、TT型为0.05±0.02μg·m L-1。三组基因型间NBP血药浓度具有统计学意义（P<0.05）,且CC型显著高于TC型、TT型;CYP2E1*5B携带GG型患者丁苯酞稳态血药浓度为0.56±0.59μg·m L-1,CG型为0.39±0.31μg·m L-1,CC型为0.099μg·m L-1。与GG型相比,GC型血药浓度显著降低（P<0.05）;对CYP3A4*1G和CYP3A5*3单倍型与丁苯酞血药浓度相关性分析显示,与慢代谢型（CCCC）相比,中间代谢型（TCTC）丁苯酞稳态血药浓度显著降低（P<0.05）;与慢代谢型（CCCC）相比,快代谢型（TTTT）无统计学意义（P>0.05）。3.CYP3A5*3 CC型T-AOC总抗氧化能力显著高于TT型,差异具有统计学意义（P<0.05）,其90日随访预后良好率及预后不良率与TT型/TC型差异均未见统计学意义（P>0.05）;CYP2E1*5B GG型T-AOC较GC型/CC型显著升高（P<0.05）,其预后良好率及预后不良率与CG型/CC型差异均未见统计学意义（P>0.05）。结论1.本研究建立的HPLC-Orbitrap法可用于急性缺血性脑卒中患者丁苯酞稳态血药浓度的检测;2.CYP3A4*1G、CYP3A5*3、CYP2E1*5B基因多态性可影响急性缺血性脑卒中患者NBP稳态血药浓度。进一步研究发现CYP3A4*1G和CYP3A5*3单倍型与NBP血药浓度相关,表现为慢代谢型（CCCC）患者血药浓度显著高于快代谢型（TTTT）。3.CYP3A5*3、CYP2E1*5B基因多态性与接受丁苯酞治疗的急性缺血性脑卒中患者血清T-AOC总抗氧化水平相关（P<0.05）;CYP3A4*1G、CYP3A5*3、CYP2E1*5B基因多态性与急性缺血性脑卒中患者丁苯酞良好预后未见有相关性。