罗格列酮对人肝癌SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的影响及其机制研究

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目的:通过建立人肝癌SMMC7721细胞裸鼠移植瘤模型,研究罗格列酮(Rosiglitazone, ROZ)对裸鼠移植性SMMC7721人肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机理。方法:1.人肝癌SMMC7721细胞裸鼠移植瘤模型的建立与分组:BALB/C裸小鼠分别于背侧后部皮下接种0.2ml/只(相当于1×107个细胞)。20只实验裸鼠分为4组,即生理盐水(NS)组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)对照组、罗格列酮(ROZ)治疗组、5-Fu+ROZ联合治疗组。成瘤后,NS组腹腔注射生理盐水,5-Fu对照组腹腔注射5-Fu(20mg/kg)、ROZ治疗组腹腔注射ROZ(25mg/kg)、5-Fu+ROZ联合治疗组腹腔注射5-Fu(20mg/kg)和ROZ(25mg/kg)。各组均隔日腹腔注射给药。2.评价罗格列酮治疗人肝癌的有效性:观察移植瘤生长情况,测裸鼠体重和移植瘤体积;处死后,称瘤重、测体积,计算抑瘤率;光镜、电镜观察移植瘤形态变化;流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布;Western blot检测移植瘤组织中PPARγ、Cyclin D1、p21WAF1/Cip1、磷酸化Rb、总Rb蛋白表达变化。结果:1.成功建立了人肝癌细胞裸鼠异种移植瘤模型。NS组平均瘤重3.071g,5-Fu对照组平均瘤重1.512g,瘤重抑瘤率50.1%;ROZ治疗组平均瘤重1.576g,瘤重抑瘤率48.7%;5-Fu+ROZ联合治疗组平均瘤重1.033g,瘤重抑瘤率66.4%;与NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2.与NS组相比,各处理组移植瘤细胞异型性降低,癌巢较清楚,癌细胞大小较均匀,病理性核分裂相减少,可见凋亡小体,癌巢中可见大片的出血和坏死。3.流式细胞仪检测结果显示,各处理组处于G0/G1期细胞含量明显增多,S期细胞影响不大,而G2/M期细胞则明显减少,并出现较高的亚二倍体峰,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05),发生了G1期阻滞,以ROZ与5-Fu合用时,其阻滞作用更明显。4. Western blot分析显示:四组移植瘤组织中均有PPARγ蛋白的表达,而在经ROZ、5-Fu以及两者联合应用处理之后,移植瘤组织中PPARγ蛋白的表达有所增高(P<0.05);移植瘤组织中Cyclin D1蛋白表达明显降低,p21WAF1/Cip1蛋白表达明显增高(P<0.05);总Rb蛋白的表达受处理因素影响较小,而各处理组移植瘤组织中Rb蛋白的磷酸化水平明显降低(P<0.05);且显示以上各蛋白表达的改变以5-Fu+ROZ治疗组最为显著,ROZ治疗组与5-Fu对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.罗格列酮对裸鼠体内移植性人肝癌SMMC7721细胞具有明显的抑制增殖作用。2.罗格列酮能在体内诱导SMMC7721细胞阻滞在G1期,并诱导其凋亡。3.罗格列酮可能通过诱导PPARγ蛋白表达,下调Cyclin D1蛋白表达,上调p21WAF1/Cip1蛋白表达,降低Rb蛋白磷酸化水平,从而有效地抑制SMMC7721细胞增殖,阻滞癌细胞于G1期。
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