高效液相色谱(HPLC)作为一种高效、快速的分离分析技术,已广泛的应用于众多的研究领域中,特别是多维色谱以及联用技术在蛋白质组学研究中的应用,也为进一步进行一些临床监测和疾病的早期诊断提供了研究的新技术和新思路,越来越使HPLC受到了关注。对临床复杂的样本,如何选择合适的HPLC分析手段来是实现临床的监测和早期诊断面临的一大课题。针对于此,本文将从白血病患者血清、白血病细胞以及慢性粒细胞白血病细胞株K562中入手,采集正常人血清、血浆和相关细胞株并用色谱分离,通过样本中差异蛋白的分析,建立了白血病蛋白质组学体系研究中HPLC方法。 论文包括四部分: 1.文献综述:概括的介绍了HPLC法在临床医学领域、蛋白质组学研究中的应用,以及目前蛋白质组学在白血病研究中的重要意义。 2.二维液相色谱-质谱分离鉴定白血病患者血清中的蛋白质:对三种不同的二维色谱分离模式进行了条件优化,选用弱阴离子交换色谱-反相高效液相色谱作为血清蛋白质组研究中的分离方法,对白血病患者及健康人的血清蛋白进行了分离;采用基质辅助电离解析时间飞行质谱对分离组分进行了检测,通过分析质谱结果,找出了白血病患者与健康人血清中的差异蛋白。 3.HPLC分离-质谱鉴定K562细胞株蛋白:建立了二维色谱分离-基质辅助电离解析时间飞行质谱检测细胞蛋白的研究方法。通过反相高效液相色谱、弱阴离子交换色谱-反相色谱、排阻色谱-反相色谱这三种色谱模式对K562细胞蛋白进行分离,收集的色谱馏分采用基质辅助电离解析时间飞行质谱检测,将这三种分离模式所获得的蛋白质数据进行比较后得出结论:当选择排阻色谱-反相色谱构建K562细胞蛋白质图谱时,可以检测到分子量从2KD到130KD左右的120多种蛋白,所获得的蛋白质数目最多,信息最为全面。此法的建立为白血病的临床研究提供了一种有效的手段。