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第一章黄芪注射液对外周血内皮祖细胞数量及功能的影响目的:观察黄芪注射液（AMI）对人外周血内皮祖细胞（endothelialprogenitor cells,EPCs）的数量和迁移、黏附、体外血管生成能力的影响;以及对EPCs增殖、分化及细胞周期的影响。方法:取健康成人空腹外周血10ml,用密度梯度离心法获取单个核细胞（MNCs）,培养7天后,收集贴壁细胞,贴壁细胞随机分成5组:（1）对照组;（2）AMI各浓度组（共4组）:在培养液中加入终浓度为0.2mg/ml、2mg/ml、20mg/ml、200mg/ml AMI培养24h,其中20mg/ml组观察不同时间（0h、6h、12h、24h、48h）。采用多波长激光共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope,LSCM）鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs;倒置荧光显微镜对每孔EPCs进行计数;流式细胞仪检测细胞表型;改良的Boyden小室检测EPCs迁移能力;黏附能力实验检测EPCs的黏附能力;体外血管生成试剂盒检测EPCs的血管生成能力;MTT比色法检测EPCs的增殖能力;流式细胞仪检测EPCs分化和细胞周期分布。结果:（1）AMI对外周血EPCs数量的影响:AMI明显增加EPCs的数量,呈一定的量效与时效关系,EPCs数量在2 mg/ml浓度时开始较对照组明显增加,在浓度为20mg/ml时最为显著（P＜0.01）;20mg/ml AMI作用6h后,EPCs数量开始明显增加（P＜0.05）,24h达到高峰（P＜0.01）,48h时略有下降,但仍明显高于对照组（P＜0.01）。（2）AMI对外周血EPCs迁移能力的影响:AMI明显增加EPCs的迁移能力,呈一定的量效与时效关系,2 mg/ml浓度时开始明显增强,20mg/ml时最为显著（P＜0.01）;20mg/ml AMI作用6h后,EPCs迁移能力开始明显增强（P＜0.05）,24h达到高峰（P＜0.01）,48h时略有下降,但仍明显高于对照组（P＜0.01）。（3）AMI对外周血EPCs黏附能力的影响:AMI明显增加EPCs的黏附能力,呈一定的量效与时效关系,在2 mg/ml浓度时开始较对照组明显增强（P＜0.01）,于20mg/ml时达最大效应（P＜0.01）。20mg/ml AMI作用6h后,EPCs黏附能力开始明显增强（P＜0.05）,24h达到高峰（P＜0.01）,48h时略有下降,但仍明显高于对照组（P＜0.01）。（4）AMI对外周血EPCs体外血管生成能力的影响:AMI显著增强了EPCs的体外血管生成能力,在浓度为20mg/ml时最为显著（P＜0.01）,并且形成的管腔样结构也较对照组复杂;20mg/ml AMI作用6h后,EPCs体外血管生成能力开始明显增强（P＜0.05）,于24h达到高峰（P＜0.01）。（5）AMI对外周血EPCs增殖的影响:AMI明显增加EPCs的增殖能力,呈一定的量效与时效关系,在2 mg/ml浓度时开始较对照组明显增强（P＜0.01）,于20mg/ml时达最大效应（P＜0.01）。20mg/ml AMI作用6h后,EPCs增殖能力开始明显增强（P＜0.01）,24h达到高峰（P＜0.01）,48h时略有下降,但仍明显高于对照组（P＜0.01）。（6）AMI对外周血EPCs细胞周期的影响:AMI2mg/ml浓度开始对EPCs细胞周期分布具有影响,与对照组比较,EPCs在G0/G1期的比例减少（P＜0.05）,而S期和G2/M期的比例增高（P＜0.05或0.01）,于AMI 20mg/ml时达最大效应（P＜0.01）。（7）AMI对外周血EPCs分化的影响:AMI 2mg/ml浓度开始促进EPCs向内皮细胞系分化,EPCs表达单核细胞表面标志CD14+、CD64+细胞百分比明显降低,而内皮细胞特异性标志vWF+细胞百分比明显升高,（P＜0.05或0.01）,在浓度为20mg/ml时达最大效应。结论:（1）AMI在体外能增加EPCs数量,作用呈浓度和时间依赖性;（2）AMI在体外能改善EPCs的增殖、迁移、黏附、体外血管生成能力,作用呈浓度和时间依赖性;（3）AMI影响EPCs细胞周期分布,使EPCs处于S期和G2/M期的细胞显著增多,而G0/G1期细胞相对比例减少;（4）AMI使EPCs表达单核/巨噬细胞表面标志CD14+、CD64+细胞百分比明显降低,而内皮细胞特异性标志vWF+细胞百分比明显升高,提示AMI可以阻止EPCs向巨噬细胞系分化,促进EPCs向内皮细胞分化。第二章黄芪注射液对高糖培养的人外周血内皮祖细胞p38 MAPK信号通路的影响目的:观察黄芪注射液（AMI）对高浓度葡萄糖培养的人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）p38信号通路（p38 MAPK）的影响,探讨高浓度葡萄糖对EPCs的影响以及AMI对EPCs数量及功能影响的信号转导机制。方法:不同浓度葡萄糖孵育EPCs24h以及30mM浓度葡萄糖孵育EPCs不同时间;不同浓度AMI预处理EPCs24h以及20mg/ml浓度AMI预处理EPCs不同时间后,再给予高浓度葡萄糖刺激EPCs60min;采用倒置荧光显微镜对每孔EPCs进行计数;MTT比色法检测EPCs的增殖能力;流式细胞仪检测EPCs分化。Western Blot检测p38 MAPK总蛋白及其磷酸化表达。结果:（1）高葡萄糖以浓度及时间依赖方式减少EPCs的数量,降低EPCs的增殖及向内皮细胞系分化能力（P＜0.05或0.01）,给予AMI及p38 MAPK特异性阻断剂SB203580预处理后,EPCs数量明显增加,增殖及向内皮细胞系分化能力明显增强（P＜0.05或0.01）;（2）高葡萄糖以浓度及时间依赖方式增强EPCsp38 MAPK的磷酸化表达（P＜0.01）;（3）AMI可以以浓度及时间依赖方式抑制高葡萄糖所致的EPCsp38MAPK磷酸化表达（P＜0.05或0.01）。结论:（1）体外培养条件下高葡萄糖以浓度及时间依赖方式减少外周血EPCs数量,降低EPCs的增殖及向内皮细胞系分化能力。（2）AMI及p38 MAPK特异性阻断剂SB203580预处理可以增加高葡萄糖培养的EPCs数量及改善其增殖、分化能力;（3）高葡萄糖以浓度及时间依赖方式增强EPCs p38MAPK磷酸化表达,而AMI可以以浓度及时间依赖方式抑制高葡萄糖所致的p38MAPK磷酸化表达,这可能是AMI增加EPCs数量,改善EPCs功能的机制之一。