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辅酶Q10是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物,对缓解体力疲劳、抗氧化、提高机体免疫力有着特殊意义。以脂质体作为输送系统是改善辅酶Q10等亲脂性营养物的水溶性并提高其口服生物利用度的有效途径,可作为营养强化剂添加到运动饮料中,充分发挥其生物效应。采用冷冻干燥法制备的辅酶Q10前体脂质体能进一步提高辅酶Q10脂质体的长期贮存稳定性。本论文研究了辅酶Q10纳米脂质体强化运动饮料的稳定性并选择合适的超高压杀菌条件;采用动物试验评价其抗疲劳效果;并进一步研究了辅酶Q10前体脂质体的冷冻干燥工艺、冻干保护剂、配方及贮存稳定性。
研究辅酶Q10纳米脂质体强化运动饮料的稳定性并优化超高压杀菌条件。通过响应面分析确定在温度为20~25℃时超高压杀菌的最优工艺参数为:压力394MPa,保压时间8.44min。高压处理后该饮料中菌落总数低于10cfu/mL,其中辅酶Q10纳米脂质体平均粒径仍可维持在100nm以下,包封率在90%以上,4℃贮存6个月后辅酶Q10的保留率可维持在90%以上。
通过动物试验评价辅酶Q10纳米脂质体强化运动饮料的抗疲劳作用,同时研究了采用纳米脂质体作为载体输送的辅酶Q10在小鼠血浆、肝脏和心脏组织中的分布。该运动饮料能延长小鼠负重游泳时间,维持游泳小鼠肝糖原水平,抑制蛋白质分解,降低血清中血乳酸含量,并显著提高血清中超氧化物歧化酶活力(P<0.05),降低血清中丙二醛含量(P<0.05),从而延缓疲劳的产生或有助于运动后疲劳的消除。以纳米脂质体为输送系统具有肝脏被动靶向性,有效提高了辅酶Q10在小鼠肝脏中的蓄积量(5.56±0.90μg/g,P<0.05)。
为提高辅酶Q10脂质体的长期贮存稳定性,采用冷冻干燥法成功研制了具有良好复水特性的辅酶Q10前体脂质体。对其冻干工艺进行了优化,确定冻干最优工艺为:-70℃快速预冻,保持24h;冷冻干燥参数为-30℃22h,-10℃10h,-4℃5h,25℃3h,(升温速率1.5℃/min)。初步选择蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖等作为冻干保护剂,比较冻干后辅酶Q10前体脂质体的形态及复水后形成的辅酶Q10脂质体的平均粒径和包封率。确定最优保护剂为海藻糖,浓度为20%(w/v),与卵磷脂质量比为4:1。确定用于冻干的辅酶Q10脂质体配方为辅酶Q10/蛋黄磷脂/胆固醇/吐温80=0.47:2.5:0.4:1.8(w/w),水化介质为磷酸盐缓冲液(pH7.4,0.01mol/L)。
采用冷冻干燥法制得的辅酶Qlo前体脂质体呈淡黄色均匀饼状,水分散性好,于室温干燥条件贮存6个月,复水后得到的辅酶Q10脂质体包封率达85%以上,平均粒径为255nm,且在复水后24h内稳定。红外光谱分析表明海藻糖与磷脂P=O基团之间形成较强的氢键作用,初步认为保护剂的作用机制与“水代替假说”相符。