复方解毒化瘀方对P388/VCR细胞Bcl-2表达影响的研究

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目的:  本研究拟建立P388/VCR细胞白血病多药耐药模型,予小、中、大剂量的复方解毒化瘀方联合长春新碱(VCR)逆转白血病多药耐药,用流式细胞术检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,探讨复方解毒化瘀方逆转白血病多药耐药可能的分子机制。  方法:  (1)细胞的培养:将P388/VCR细胞在37℃、5%CO2条件的培养箱内进行培养,按常规细胞传代方法进行传代。  (2)实验分组:所购裸鼠随机分成:ZC:正常对照组、MX:模型组、VZ:长春新碱组、XJ:小剂量复方解毒化瘀方+VCR组、ZJ:中剂量复方解毒化瘀方+VCR组、DJ:大剂量复方解毒化瘀方+VCR组。  (3)造模及用药:取对数生长期的P388/VCR细胞,含2×106个、量为0.2ml/只于裸鼠腹腔接种。造模后开始观察观察各组裸鼠精神、觅食、皮肤色泽、活动度,体重、腹水情况;取腹水、外周血及骨髓涂片,吉姆萨染色,油镜下观察细胞形态,计算白血病细胞数及所占百分比,判断造模是否成功;分别给裸鼠蒸馏水、生理盐水灌胃,VCR腹腔注射,小、中、大剂量复方解毒化瘀方灌胃及VCR,长春新碱:(1次/2d X5次),复方解毒化瘀方:(1次/d×10次);造模开始后查外周血(1次/2d),测量瘤块及观察裸鼠一般情况。  (4)用MTT法分别检测P388/VCR细胞株体内外的耐药倍数。  (5)观察用药前、后裸鼠的精神、觅食、皮肤色泽、活动度,体重、腹水,测量裸鼠瘤块体积情况,抽取腹水、外周血,骨髓涂片,观察腹水、外周血及骨髓原始+早幼粒细胞百分比。  (6)各组用药结束后,次日眼球取血,用流式细胞术检测各组Bcl-2表达。  结果:  (1)裸鼠接种后,腹水形成时间:4.50±0.50天,瘤块形成时间:5.63±0.77天,成瘤率83%,接种前各组体重随时间延长,体重明显增加,接种后随着裸鼠腹水、瘤块形成时继续增加,随实验进程裸鼠精神、饮食变差,抽取腹水,多次外周取血,裸鼠体重开始下降,在用药后体重缓慢下降。  (2)MTT法测得P388/VCR细胞株并计数出:体外耐药倍数5.68倍,接种体内后其耐药倍数为4.6倍,其耐药性仍保持。  (3)接种后裸鼠腹水、瘤块形成时,抽取腹水、外周血及骨髓涂片的白血病细胞计数均>200个/片。  (4)流式细胞术检测裸鼠外周血细胞Bcl-2表达,ZC Bcl-2的表达甚少,MX的Bcl-2表达最高,VZ与XJ的Bcl-2表达均不同程度下降,XJ与ZJ、DJ相比有显著差异(P<0.01),ZJ较XJ的Bcl-2表达下降,DJ与ZJ相比具有差异(P<0.05),DJ的Bcl-2表达进一步下降,说明与一定浓度的复方解毒化瘀方药液作用呈负相关。  结论:  ①P388/VCR细胞株接种于裸鼠体内,其耐药性仍保持;  ②复方解毒化瘀方逆转白血病耐药细胞株P388/VCR的机制之一可能与下调Bcl-2的超量表达相关;  ③复方解毒化瘀方可降低P388/VCR耐药细胞裸鼠模型Bcl-2的表达,与一定浓度的复方解毒化瘀方药液作用呈负相关。
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