分蘖洋葱是我国北方地区的特色经济作物,葱潜隐病毒（Shallot latent virus,SLV）是侵染分蘖洋葱的主要病毒之一,其侵染植株后虽不表现出明显的症状,但仍会严重影响分蘖洋葱等葱属植物的产量和品质。目前没有发现有效的病毒病防治药剂,制备生产高质量脱毒种苗是防控SLV的有效手段,高效、灵敏的病毒检测技术是保障脱毒种苗质量的关键。本研究以SLV的分蘖洋葱分离物衣壳蛋白（coat protein,CP）为抗原,免疫昆明鼠,获得SLV的多克隆抗体,以此为基础建立了SLV间接ELISA检测技术,并结合建立的检测技术通过茎尖组织培养成功获得分蘖洋葱脱毒种苗,为SLV的高通量检测、脱毒种苗规模化生产提供技术支持。1.从疑似感染SLV的分蘖洋葱叶片中获得SLV分离物,并克隆了SLV CP基因,运用同源重组法构建重组表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,纯化后获得高纯度的SLV CP重组蛋白;以重组蛋白为抗原,免疫昆明鼠,成功制备了SLV多克隆抗体,对感染SLV的分蘖洋葱叶片粗提液的效价达256000倍,且能特异性识别SLV。2.建立并优化了SLV间接ELISA检测方法:以感染SLV的分蘖洋葱叶片粗提物为抗原在4℃条件下过夜包被酶标板,5%脱脂奶封闭60 min,125 ng/m L的检测抗体孵育1 h,500 ng/m L的酶标抗体孵育1 h。本方法的最低检测限为9.5 ng/m L;板间板内变异系数均小于5%;通过建立的间接ELISA与常规RT-PCR同时检测50份田间采集的疑似感染SLV的分蘖洋葱样品,47份样品检测结果一致,符合率可达94%。3.分别以茎尖诱导直接成苗和促愈伤分化成苗两种方式获得分蘖洋葱组培苗。本研究对外植体消毒方法进行优化,确定最佳消毒处理方式为75%乙醇浸泡30 s后2%次氯酸钠溶液浸泡15 min。通过筛选激素配比,确定最佳茎尖诱导培养基MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱芽率85.5%,平均诱导芽数3.3个;最佳愈伤培养基MS+NAA 0.4 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L,愈伤率71.7%,且愈伤状态良好;最佳生芽培养基MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,生芽率82.2%,平均分化芽数为9.23个;最佳生根培养基1/2 MS,生根率100%。利用本研究建立的SLV间接ELISA检测方法对获得的组培苗进行病毒检测,检测结果表明选择0.3-0.4 mm的茎尖进行分蘖洋葱的组培脱毒,脱毒率最高可达92%;选择已完成脱毒且生长健壮的脱毒种苗进行移栽,成活率为90%。