利用CD133~+肿瘤表面标记物分离、鉴定和培养胃癌肿瘤干细胞的实验研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ananjuben
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目的:检测CD133+在胃癌(Gastric cancer)肿瘤干细胞(Cancer stem cells, CSCs)中的表达,进一步探讨CD133+细胞在胃癌中的分布、形态特征、数量及其意义;检测肿瘤干细胞标志物CD133+在胃癌中的表达,了解肿瘤干细胞标志物CD133+与胃癌发生发展的关系及以CD133+作为胃癌肿瘤干细胞标志物的价值。方法:采用机械法分离原代培养的胃癌干细胞,观察细胞的形态;采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting, MACS)的方法分离和培养胃癌CD133-肿瘤干细胞,观察含有CD133+胃癌肿瘤干细胞球的形态;采用流式细胞术的方法检测胃癌CD133+肿瘤细胞的阳性表达率;建立胃癌动物模型,观察CD133+与CD133-致瘤率的情况及肿瘤大小的变化;免疫组化法观察肿瘤组织中CD133+表达情况。结果:1.通过机械法分离出的原代培养的胃癌干细胞发现其细胞形态小而圆。2.CD133+细胞在免疫磁珠分选法分离和培养中能够悬浮生长、增殖,并且随着培养时间的增加,细胞逐渐聚集,同时形成悬浮的肿瘤细胞球。3.筛选前细胞CD133阳性率为5.05%,筛选后细胞阳性率为88.07%,筛选后细胞的阳性率显著高于筛选前细胞的阳性率。’4.本文将新鲜分选出的5×104个CD133+与CD133-分别皮下注射至裸鼠腋下,分为阳性组(CD133+)和阴性组(CD133-),每组6只。阳性组82.5%成瘤(5/6),阴性组16.67%(1/6)。由表1结果可知,CD133+肿瘤率与肿瘤大小均高于CD133-。5.瘤体组织通过HE染色后,可观察到CD133+散在表达于细胞胞膜上。结论:CD133+是胃癌肿瘤干细胞的一种表面标记物,对于胃癌中CD133+检测的表达强度,有利于评估肿瘤生物学行为;CD133+为胃癌肿瘤干细胞的有效标志物。
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