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目的:制备磷酸酶化龙眼肉多糖CLYP2-P)和不同分子量的龙眼肉多糖水解片断(LYP2抽_)，并对这些龙眼肉多糖的修饰产物进行免疫调节活性和抗脂质过氧化活性的测定，为合理开发和利用龙眼资源提供理论依据。
方法:采用水提醇沉法提取龙眼肉多糖，木瓜蛋白酶水解法去蛋白，H2O2氧化法去色素纯化多糖。用DEAE嗣纤维素柱层析和丙烯葡聚糖凝胶色谱8-300层析对多糖进行分级纯化。用硫酸.苯盼法测定龙眼肉多糖含量。利用8ephadexG-I00凝胶柱层析法测定龙眼肉多糖其中一个组分LYP2的分子量。用三氟乙酸对LYP2进行完全酸水解后，借助高效液相色谱法分析单糖组成。利用红外光谱和核磁共振分析LYP2的结构信息。利用POCb作为酶化剂对LYP2进行磷酸酶化修饰，用磷铝蓝法测定磷酸酶化龙眼肉多糖的磷取代度，采用响应面法优化磷酸醋化龙眼肉多糖制备的反应条件，红外光谱法鉴定磷酸醋化龙眼肉多糖。利用硫酸水解法对LYP2进行不同分子量片断龙眼肉多糖的制备。刚果红实验检测磷酸酶化龙眼肉多糖LYP2-P和不同分子量片断龙眼肉多糖LYP2Mr-的三股螺旋空间结构。测定磷酸醋化龙眼肉多糖LYP2-P和不同分子量片断的龙眼肉多糖LYP2Mr-对环磷酸胶CY致免疫低下的小鼠模型的免疫调节作用，采用中性红法测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力的影响，MTI法测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力的影响，酶联免疫法(ELI8A)测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠血清中IL-2和IFN-γ的含量水平影响，TBA法测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠抗脂质过氧化的能力的影响。2010级硕士研究-E学仿论艾磷酸酶化和不同分子量片断龙跟肉多糖的制备及冀免疫调节作用和抗氧化作用的研究
结果:
1.水提醇沉法提取的龙眼肉多糖得率为8.17％，多糖含量为68.30％;木瓜蛋白酶法测定的蛋白去除率为86.42％;从0.125mol/LNaCl流分中得到分子量为147231.25的均一多糖组分LYP20LYP2经三氟乙酸完全酸水解后，HPLC检测单糖成分为葡萄糖、半乳糖醒酸、阿拉伯糖和半乳糖，各单糖摩尔比为:葡萄糖:半乳糖醒酸:阿拉伯糖z半乳糖=5.39:1.04:0.74:0.21,其中以葡萄糖含量为主。通过对红外光谱检测分析，得知LYP2具有多糖的典型结构，为?-型端基口比喃环多糖。核磁结构分析，LYP2的主链为→4)-a-D-Glcp-(1→4)-α-D-GalpA-(l→4)-α-D-Glcp-(l→4)-?-D-Glcp-(l→，在G-D-Glcp的6位0上有支链为→2)-?-D-Fruf-(l? 2)-L-sorbose-(1→。
2.响应面法优化磷酸酶化龙眼肉多糖制备的结果显示，当采用口比晓与POCh体积比为3:1，反应温度为O℃，反应时间为60min，可以得到较高的磷取代度，磷酸醋化龙眼肉多糖的取代度达0.0184。
3.水解龙眼肉多糖片断工艺条件设定为硫酸浓度lmol/L，水解温度为85℃，水解时间分别为1.5h，2.5h,3.5h,4.5h,5.5h，相应制备分子量分别为82102.50，36693.04,22473.91，10524.04,3018.43的水解龙眼肉多糖片断LYP2Mr-。
4.刚果红实验中，初步确定龙眼肉多糖LYP2、龙眼肉多糖的水解片断LYP2Mr-82102.50和磷酸酶化龙眼肉多糖有三股螺旋结构，而其余水解龙眼肉多糖片断的三股螺旋空间结构不能确定。
5.在磷酸酶化龙眼肉多糖和LYP2Mr-3018.43对环磷酸胶致免疫低下小鼠免疫调节作用方面，磷酸酶化龙眼肉多糖在40~160mg/kg的给药剂量范围内，腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力随剂量增加而增强;B、T淋巴细胞经给药后增殖能力增强，高剂量组剌激指数分别达148％和149％;血清中且-2的含量无统计学差异，但能促进IFN-y的分泌，高剂量组的血清中IFN-γ含量为101.191pg/mloLYP2协3018.43浓度在80~320mgkg的范围内，腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力随给药剂量增加而增强;B淋巴细胞的增殖能力增强，高剂量组的刺激指数达116％;T淋巴细胞的增殖能力受抑制，低剂量组的剌激指数为123％;低剂量组小鼠血清中IFN-γ含量为112.424pg/ml。
6.在磷酸酶化龙眼肉多糖和LYP2Mr-3018.43对环磷酷胶致免疫低下小鼠抗肝脂质过氧化影响方面，LYP2-P和LYP2Mr-3018.43随着给药剂量的增加抗小鼠肝脂质过氧化能力而逐渐增强，高剂量组的抑制率分别达到46.6％和48.2％。
7.相同给药剂量。Omg/kg)情况下，不同多糖刺激巨噬细胞吞噬中性红的能力:香菇多糖＞磷酸醋化龙眼肉多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞LYP2Mr-3018.43不同多糖对B淋巴细胞增殖的刺激指数:磷酸醋化龙眼肉多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞香菇多糖＞LYP2Mr-3018.43不同多糖对T淋巴细胞增殖的刺激指数=磷酸醋化龙眼肉多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞香菇多糖=LYP2LYP2-3018.43;不同多糖叫血清中IFNy含量水平:LYP2LYP2Mr-3018.43＞香菇多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞磷酸醋化多糖:不同多糖抗氧化能力:LYP2Mr-3018.43＞磷酸醋化多糖＞香菇多糖＞龙眼肉多糖LYP2。
8.在不同分子量片断龙眼肉多糖对环磷酌胶致免疫低下小鼠免疫调节作用研究中，给药剂量为80mg/kg时，不同分子量片断的龙眼肉多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的剌激能力:LYP2Mr-82102.50＞LPY2＞LYP2Mr-36693.04＞LYP2Mr-10524.04≈LYP2Mr-3018.43。对小鼠B淋巴细胞增殖能力的剌激活性:LYP2Mr-82102.5o＞LYP2协36693.04＞LYP2Mr-l0524.04＞LPY2＞LYP2陆-3018.430对小鼠T淋巴细胞增殖能力的剌激活性:LYP2Mr-82102.50＞LPY2＞LYP2Mr-36693.04＞LYP2Mr-10524.04≈LYP2Mr-3018.43小、鼠血清中IL-♂2的含量都比较低，且各组间无统计学差异。对小鼠血清中IFN-γ含量的影响:LYP22010级硕士研究生学位论文磷酸醋化和不同分子最片断龙眼肉多糖的制备及其免疫调节作用和杭氧化作用的研究Mr-82102.5o＞LPY2＞LYP2协3018.43＞LYP2Mr-10524.04≈LYP2Mr-36693.04。
9.在不同分子量片断龙眼肉多糖对环磷酸肢致免疫低下小鼠抗脂质过氧化研究中，对小鼠体内脂质过氧化的抑制率对比为:LYP2M州Mr-3018.43＞LYP2Mr-36693.04＞LPY2＞LYP2Mr-82102.50。
结论:
1.分离提取所得的龙眼肉多糖LYP2具有三股螺旋结构，含有葡萄糖、半乳糖醒酸、阿拉伯糖和半乳糖，为酸性杂多糖，以1→4链接的α、卢比喃环葡萄糖为主链，支链含1→2链接的果糖和山梨糖。说明LYP2结构复杂，在酸性环境相对稳定，且抗原特异性高。
2.响应面分析法有效分析单因素对磷酸酶化龙眼肉多糖制备的影响，磷取代结果拟合度较高，说明优化结果稳定可行。硫酸酸水解法可制备不同分子量片断的龙眼肉多糖，方法简便易行。
3.环磷酸胶致免疫低下小鼠模型中，在巨噬细胞吞噬能力、T、B淋巴细胞增殖及抗氧化能力方面，磷酸酶化修饰后的龙眼肉多糖活性强于未修饰前的LYP2和香菇多糖。从LYP2-P的免疫效应可初步推测，LYP2-P能剌激TLR-NF-KB的MyD88依赖性途径，活化NF-KB介导的体液免疫和细胞免疫，从而具有调节小鼠免疫的活性作用。但不能激活非MyD88依赖性途径中NF-KB介导的免疫作用，可为龙眼衍生物开发为外源性免疫应激干预肿瘤或抗肿瘤的辅助治疗药物提供参考依据，可与其它免疫增强剂进行联合用药，协同和增强其他免疫剂作用。
4.LYP2-P具有良好的抗氧化活性，也可成为抗氧化保健药物开发源之一。
5.实验结果表明，不同分子量片断龙眼肉多糖，分子量愈大，抗原性愈强，激活小鼠免疫活性愈强。从实验免疫效应指标可推测出LYP2Mr-82102.50能同时激活MyD88依赖性途径和非MyD88依赖性途径中NF-KB介导的免疫调节作用，且相比于其它分子量片断的龙眼肉多糖，其免疫活性最佳，可成为开发为免疫应激干预肿瘤或抗肿瘤的辅助治疗药物之一。
6.实验结果证明，分子量在10524.04-82102.50范围内，龙眼肉多糖分子量片断愈小，抗氧化功能基团-OH的释放愈多，对环磷曹先胶致免疫低下小鼠抗肝脂质过氧化的作用愈强，降解后的龙眼肉多糖片断具有理想的抗氧化作用。
方法:采用水提醇沉法提取龙眼肉多糖，木瓜蛋白酶水解法去蛋白，H2O2氧化法去色素纯化多糖。用DEAE嗣纤维素柱层析和丙烯葡聚糖凝胶色谱8-300层析对多糖进行分级纯化。用硫酸.苯盼法测定龙眼肉多糖含量。利用8ephadexG-I00凝胶柱层析法测定龙眼肉多糖其中一个组分LYP2的分子量。用三氟乙酸对LYP2进行完全酸水解后，借助高效液相色谱法分析单糖组成。利用红外光谱和核磁共振分析LYP2的结构信息。利用POCb作为酶化剂对LYP2进行磷酸酶化修饰，用磷铝蓝法测定磷酸酶化龙眼肉多糖的磷取代度，采用响应面法优化磷酸醋化龙眼肉多糖制备的反应条件，红外光谱法鉴定磷酸醋化龙眼肉多糖。利用硫酸水解法对LYP2进行不同分子量片断龙眼肉多糖的制备。刚果红实验检测磷酸酶化龙眼肉多糖LYP2-P和不同分子量片断龙眼肉多糖LYP2Mr-的三股螺旋空间结构。测定磷酸醋化龙眼肉多糖LYP2-P和不同分子量片断的龙眼肉多糖LYP2Mr-对环磷酸胶CY致免疫低下的小鼠模型的免疫调节作用，采用中性红法测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力的影响，MTI法测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力的影响，酶联免疫法(ELI8A)测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠血清中IL-2和IFN-γ的含量水平影响，TBA法测定LYP2-P、LYP2Mr-对小鼠抗脂质过氧化的能力的影响。2010级硕士研究-E学仿论艾磷酸酶化和不同分子量片断龙跟肉多糖的制备及冀免疫调节作用和抗氧化作用的研究
结果:
1.水提醇沉法提取的龙眼肉多糖得率为8.17％，多糖含量为68.30％;木瓜蛋白酶法测定的蛋白去除率为86.42％;从0.125mol/LNaCl流分中得到分子量为147231.25的均一多糖组分LYP20LYP2经三氟乙酸完全酸水解后，HPLC检测单糖成分为葡萄糖、半乳糖醒酸、阿拉伯糖和半乳糖，各单糖摩尔比为:葡萄糖:半乳糖醒酸:阿拉伯糖z半乳糖=5.39:1.04:0.74:0.21,其中以葡萄糖含量为主。通过对红外光谱检测分析，得知LYP2具有多糖的典型结构，为?-型端基口比喃环多糖。核磁结构分析，LYP2的主链为→4)-a-D-Glcp-(1→4)-α-D-GalpA-(l→4)-α-D-Glcp-(l→4)-?-D-Glcp-(l→，在G-D-Glcp的6位0上有支链为→2)-?-D-Fruf-(l? 2)-L-sorbose-(1→。
2.响应面法优化磷酸酶化龙眼肉多糖制备的结果显示，当采用口比晓与POCh体积比为3:1，反应温度为O℃，反应时间为60min，可以得到较高的磷取代度，磷酸醋化龙眼肉多糖的取代度达0.0184。
3.水解龙眼肉多糖片断工艺条件设定为硫酸浓度lmol/L，水解温度为85℃，水解时间分别为1.5h，2.5h,3.5h,4.5h,5.5h，相应制备分子量分别为82102.50，36693.04,22473.91，10524.04,3018.43的水解龙眼肉多糖片断LYP2Mr-。
4.刚果红实验中，初步确定龙眼肉多糖LYP2、龙眼肉多糖的水解片断LYP2Mr-82102.50和磷酸酶化龙眼肉多糖有三股螺旋结构，而其余水解龙眼肉多糖片断的三股螺旋空间结构不能确定。
5.在磷酸酶化龙眼肉多糖和LYP2Mr-3018.43对环磷酸胶致免疫低下小鼠免疫调节作用方面，磷酸酶化龙眼肉多糖在40~160mg/kg的给药剂量范围内，腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力随剂量增加而增强;B、T淋巴细胞经给药后增殖能力增强，高剂量组剌激指数分别达148％和149％;血清中且-2的含量无统计学差异，但能促进IFN-y的分泌，高剂量组的血清中IFN-γ含量为101.191pg/mloLYP2协3018.43浓度在80~320mgkg的范围内，腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力随给药剂量增加而增强;B淋巴细胞的增殖能力增强，高剂量组的刺激指数达116％;T淋巴细胞的增殖能力受抑制，低剂量组的剌激指数为123％;低剂量组小鼠血清中IFN-γ含量为112.424pg/ml。
6.在磷酸酶化龙眼肉多糖和LYP2Mr-3018.43对环磷酷胶致免疫低下小鼠抗肝脂质过氧化影响方面，LYP2-P和LYP2Mr-3018.43随着给药剂量的增加抗小鼠肝脂质过氧化能力而逐渐增强，高剂量组的抑制率分别达到46.6％和48.2％。
7.相同给药剂量。Omg/kg)情况下，不同多糖刺激巨噬细胞吞噬中性红的能力:香菇多糖＞磷酸醋化龙眼肉多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞LYP2Mr-3018.43不同多糖对B淋巴细胞增殖的刺激指数:磷酸醋化龙眼肉多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞香菇多糖＞LYP2Mr-3018.43不同多糖对T淋巴细胞增殖的刺激指数=磷酸醋化龙眼肉多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞香菇多糖=LYP2LYP2-3018.43;不同多糖叫血清中IFNy含量水平:LYP2LYP2Mr-3018.43＞香菇多糖＞龙眼肉多糖LYP2＞磷酸醋化多糖:不同多糖抗氧化能力:LYP2Mr-3018.43＞磷酸醋化多糖＞香菇多糖＞龙眼肉多糖LYP2。
8.在不同分子量片断龙眼肉多糖对环磷酌胶致免疫低下小鼠免疫调节作用研究中，给药剂量为80mg/kg时，不同分子量片断的龙眼肉多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的剌激能力:LYP2Mr-82102.50＞LPY2＞LYP2Mr-36693.04＞LYP2Mr-10524.04≈LYP2Mr-3018.43。对小鼠B淋巴细胞增殖能力的剌激活性:LYP2Mr-82102.5o＞LYP2协36693.04＞LYP2Mr-l0524.04＞LPY2＞LYP2陆-3018.430对小鼠T淋巴细胞增殖能力的剌激活性:LYP2Mr-82102.50＞LPY2＞LYP2Mr-36693.04＞LYP2Mr-10524.04≈LYP2Mr-3018.43小、鼠血清中IL-♂2的含量都比较低，且各组间无统计学差异。对小鼠血清中IFN-γ含量的影响:LYP22010级硕士研究生学位论文磷酸醋化和不同分子最片断龙眼肉多糖的制备及其免疫调节作用和杭氧化作用的研究Mr-82102.5o＞LPY2＞LYP2协3018.43＞LYP2Mr-10524.04≈LYP2Mr-36693.04。
9.在不同分子量片断龙眼肉多糖对环磷酸肢致免疫低下小鼠抗脂质过氧化研究中，对小鼠体内脂质过氧化的抑制率对比为:LYP2M州Mr-3018.43＞LYP2Mr-36693.04＞LPY2＞LYP2Mr-82102.50。
结论:
1.分离提取所得的龙眼肉多糖LYP2具有三股螺旋结构，含有葡萄糖、半乳糖醒酸、阿拉伯糖和半乳糖，为酸性杂多糖，以1→4链接的α、卢比喃环葡萄糖为主链，支链含1→2链接的果糖和山梨糖。说明LYP2结构复杂，在酸性环境相对稳定，且抗原特异性高。
2.响应面分析法有效分析单因素对磷酸酶化龙眼肉多糖制备的影响，磷取代结果拟合度较高，说明优化结果稳定可行。硫酸酸水解法可制备不同分子量片断的龙眼肉多糖，方法简便易行。
3.环磷酸胶致免疫低下小鼠模型中，在巨噬细胞吞噬能力、T、B淋巴细胞增殖及抗氧化能力方面，磷酸酶化修饰后的龙眼肉多糖活性强于未修饰前的LYP2和香菇多糖。从LYP2-P的免疫效应可初步推测，LYP2-P能剌激TLR-NF-KB的MyD88依赖性途径，活化NF-KB介导的体液免疫和细胞免疫，从而具有调节小鼠免疫的活性作用。但不能激活非MyD88依赖性途径中NF-KB介导的免疫作用，可为龙眼衍生物开发为外源性免疫应激干预肿瘤或抗肿瘤的辅助治疗药物提供参考依据，可与其它免疫增强剂进行联合用药，协同和增强其他免疫剂作用。
4.LYP2-P具有良好的抗氧化活性，也可成为抗氧化保健药物开发源之一。
5.实验结果表明，不同分子量片断龙眼肉多糖，分子量愈大，抗原性愈强，激活小鼠免疫活性愈强。从实验免疫效应指标可推测出LYP2Mr-82102.50能同时激活MyD88依赖性途径和非MyD88依赖性途径中NF-KB介导的免疫调节作用，且相比于其它分子量片断的龙眼肉多糖，其免疫活性最佳，可成为开发为免疫应激干预肿瘤或抗肿瘤的辅助治疗药物之一。
6.实验结果证明，分子量在10524.04-82102.50范围内，龙眼肉多糖分子量片断愈小，抗氧化功能基团-OH的释放愈多，对环磷曹先胶致免疫低下小鼠抗肝脂质过氧化的作用愈强，降解后的龙眼肉多糖片断具有理想的抗氧化作用。