研究目的:本研究通过建立慢性间歇性缺氧(CIH)小鼠模型,模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS),以探究CIH合并高脂饮食(HFD)诱发的肥胖对小鼠肝损伤产生的影响,并探索线粒体关键调节因子亲环蛋白D(CypD)、线粒体功能和内质网应激在OSAHS合并肥胖所致非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及可能机制。研究方法:1.建立CIH和HFD小鼠模型并分为CON组(Control)、CIH组、HFD组和HFD+CIH组;2.通过生化检测法,检测血清中肝酶活性及血清和肝脏的脂代谢生化指标;3.通过HE染色观察肝组织病理变化;4.通过称量小鼠的体重、肝重,计算肝/体重比;5.通过Real-time PCR检测不同处理组小鼠肝脏中的脂肪酸累积、胆固醇分解、合成相关基因的表达变化;6.通过马森染色及天狼星染色观察肝脏纤维化程度;7.通过Western blot和Real-time PCR检测小鼠肝脏的CypD蛋白及线粒体功能相关蛋白、内质网功能相关基因和蛋白的表达变化,以探讨CypD-Mitochondria-ER通路在CIH合并肥胖所致肝损伤中可能发挥的作用及机制。研究结果:1.研究发现,CIH和HFD都能升高小鼠血清中的肝酶水平,其中以CIH+HFD处理组小鼠肝酶的上升最为明显;2.通过HE染色,可观察到CIH或HFD处理后的小鼠肝细胞发生了明显的脂肪沉积和空泡样改变,其中CIH+HFD组小鼠最为严重;3.CIH和HFD都能显著增加小鼠肝脏重量,HFD相比较CIH对小鼠体重影响更大,CIH组小鼠的肝/体重比最高;4.CIH和HFD均能使肝脏及血清中的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)及血清低密度脂蛋白(LDL-C)较CON组明显升高,其中以HFD+CIH组小鼠脂代谢水平的升高最为显著;5.通过RT-PCR检测可发现,HFD+CIH组小鼠的脂肪酸累积增加、胆固醇合成增加、分解减少,共同促进了肝脂肪变的发生;6.对各组小鼠肝脏进行马森染色及天狼星染色,均未发现明显肝纤维化;7.通过Western Blot检测发现:和对照组相比,HFD+CIH处理后小鼠CypD蛋白表达水平显著升高,同时有线粒体分裂蛋白FIS1、MTP18表达明显上调及融合蛋白MFN1表达水平显著下调,提示HFD+CIH共同作用,导致小鼠肝脏线粒体结构和功能紊乱;8.通过RT-PCR和Western Blot检测,发现CIH和HFD处理均能上调小鼠的内质网功能相关基因、蛋白水平,其中以HFD+CIH组上调最为明显。研究结论:本文通过建立小鼠CIH和HFD模型,发现CIH+HFD会导致小鼠肝脏明显受损,而CypD-Mitochondria-ER通路可能介导了OSAHS合并肥胖所致的NAFLD。