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单增李斯特菌(Listeria monocytogens, LM)是一种重要的食源性致病菌,它与E. coli O157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌统称为最重要的四大食源性致病菌。在LM的众多血清型中,4b型是出现最多,也是最能引起人类和牲畜患病的血清型,该菌能引起人、畜的李斯特菌病,感染后的症状主要表现为败血症和脑膜炎。本研究旨在建立一种免疫分析方法用于样品中LM(血清型4b)的快速筛选。研究内容包括三个部分：(1)LM鞭毛的制备本研究将在22°C和37℃培养的LM(血清型4b)通过超速离心法获得鞭毛,最终通过SDS-PAGE试验以及透射电镜加以证明。研究结果表明,22°C培养的LM有大量鞭毛产生,而37°C没有或只有一根鞭毛产生；另外,经酸解超速离心法获得的鞭毛浓度高(1.1 mg/mL),纯度高,而且试验耗时短,适用于LM鞭毛蛋白的提取。(2)LM选择性培养方法的建立本研究按FDA法进行增菌,在一定的体系内观察金黄色葡萄球菌、志贺氏菌以及E coli 0157等三种杂菌对LM的影响。研究结果表明,选择性培养基对三种杂菌有一定的抑制作用；其中,BLEB(含吖啶黄素)对分离菌的抑制效果最好,其次是BLEB(不含吖啶黄素)和TSB。(3)LM双抗夹心ELISA方法的建立用LM及其制备的LM.鞭毛蛋白作为免疫原,得到兔抗LM多克隆抗体及鼠抗LM鞭毛蛋白多克隆抗体,经10周5次免疫后,抗体效价可达106以上。两种多抗经纯化后免疫血清的浓度分别为9.083 mg/mL和7.940 mg/mL。建立了LM双抗夹心间接ELISA检测方法,通过对包被液,包被时间、底物作用时间、酶标二抗稀释倍数以及封闭液进行优化,从而确定了双抗夹心ELISA法检测LM的最佳反应条件。研究结果表明,最佳反应条件分别为：包被液为0.05 mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6),TMB底物显色时间为15 min,羊抗鼠酶标二抗稀释倍数为5000倍,封闭液为1% BSA,包被条件为37°C,2 h。