猪瘟病毒广西流行株E<,2>基因扩增与反应条件的优化研究

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaishizai2009
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本研究引用HCV特异性引物A1/A2直接对来自广西部分地区58份疑似猪瘟病料 进行检测,其中34份为阳性,阳性率为58.32%。再根据已发表的猪瘟病毒核酸序列, 设计并合成4对EP1/EP4、EP2/EP3、EP3/EP7和EP5/EP6,以引物EP1/EP4和EP2/EP3或 EP3/EP7和EP5/EP6配对,应用RT-PCR技术分两段扩增猪瘟病毒全E2基因,并对反 应条件进行优化。结果显示:引物EP1/EP4和EP2/EP3只能扩增猪瘟兔化弱毒(HCV) 和石门系强毒而不能扩增广西流行株:EP3/EP7和EP5/EP6则可成功扩增出广西流行株 和另外两个毒株。反应条件中,反转录所需的总RNA量为10μ1(约20μg);PCR扩增 时,cDNA用量为12.5μl,正、负引物各用 50 Pmol,EP3/EP7和EPS/EP6引物对分别以 57℃t和61℃的退火温度PCR扩增35个循环,PCR产物量和扩增特异性句达到最佳水 平。 猪瘟病毒广西流行株E2基因的成功扩增和最佳反应条件的建立为今后E2基因的克 隆与序列分析及其更深入的研究奠定了实验基础。
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