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貉作为我国重要的经济动物,其养殖规模、养殖数量在我国毛皮动物的养殖业中均占有举足轻重的地位,但在养殖过程中经常出现种群内呼吸系统的细菌性感染。本研究通过对收集的病貉肺脏样品进行细菌分离鉴定,研究引起貉肺炎的主要病原菌,并通过对貉血液检测,探究肺炎貉血液的并发病原微生物,意在为临床上貉的健康饲养和肺炎的检测、防治提供参考。
1.貉肺部大肠杆菌的分离与鉴定
本研究于2018年7月至9月间,对收集的有呼吸道症状的吉林和秦皇岛两地各15例病死貉进行肺脏无菌采集、细菌的分离培养,对分离到的菌株进行形态学观察、生化水平鉴定以及分子生物水平鉴定,共计分离出7株大肠杆菌,其中吉林地区分离出3株,秦皇岛地区分离出4株,对分离株的耐药性、致病性进行了分析。结果表明:分离株在伊红美蓝培养中生长为暗黑色菌落,光照下有金属光泽且有淡淡臭气;革兰氏染色结果为阴性;分离株的α-D-乳糖、D-果糖、肌醇、L-乳酸、D-水杨苷、L-组胺等反应均为阳性,与大肠杆菌鉴定标准相符合;16SrRNA序列与数据库中大肠杆菌同源性达到98-99%。药敏结果表明对头孢他啶、头孢曲松2种抗生素高度敏感;对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、卡那霉素、四环素、克林霉素、杆菌肽等8种抗生素耐药。小鼠的致病性研究结果表明:攻毒12h后出现精神萎靡、嗜睡、进食量下降现象,攻毒24h时小鼠呈现出聚堆、浑身战栗、毛发凌乱等现象,并出现死亡,所有小鼠于96h内全部死亡。
2.貉肺部肺炎克雷伯菌的分离鉴定
共计分离出5株肺炎克雷伯菌,其中吉林地区分离出2株,秦皇岛地区分离出3株,对分离株进行了粘丝试验、血清型分析、毒力基因检测、药敏试验及致病性试验。结果表明:分离株在麦康凯培养基上生长发酵,形成较大的粘液型红色菌落,红色可扩散至菌落周围的培养基中;革兰氏染色结果为阴性;分离株的α-D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-甘露糖、D-山梨醇、D-水杨苷等反应均为阳性,与肺炎克雷伯菌鉴定标准相符合;其16SrRNA序列与数据库中肺炎克雷伯菌同源性达到90-99%。药敏结果表明对头孢他啶、氧氟沙星、阿米卡星、氟苯尼考4种抗生素高度敏感;对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、红霉素、卡那霉素等11种抗生素耐药,表现出极强的耐药性。粘丝试验结果均为阴性。血清型分析结果为分离株不属于6种荚膜血清型的任何一种。毒力基因检测结果显示:11种毒力基因共检出5种毒力基因,分别为fim、kfu、uge、ure、wabG基因。小鼠的致病性研究结果表明:经腹腔注射的小鼠攻毒12h后出现呼吸急促、精神萎靡、卧地不起、进食量下降现象,攻毒24h时出现死亡,其余小鼠站立不稳,被毛逆立、无光泽,攻毒96h时小鼠全部死亡。
3.貉血液中血虫体的检测
收集上述病貉未凝血,对血液细胞进行形态观察、多种染色镜检检测血液病原微生物。结果表明:30份血液的红细胞中均寄生有不同程度的血虫体,其中吉林地区病貉血虫体平均感染率为42.9%,秦皇岛地区病貉血虫体平均感染率为30.1%。感染血虫体的红细胞失去正常红细胞两面凹陷的扁平圆饼状形态,表面附着多个大小不一的血虫体,呈现出星芒状、锯齿状;姬姆萨染色将血虫体染色为蓝紫色;亚甲蓝染色将血虫体染色为深蓝色;迪夫染色将血虫体染色为紫红色。
1.貉肺部大肠杆菌的分离与鉴定
本研究于2018年7月至9月间,对收集的有呼吸道症状的吉林和秦皇岛两地各15例病死貉进行肺脏无菌采集、细菌的分离培养,对分离到的菌株进行形态学观察、生化水平鉴定以及分子生物水平鉴定,共计分离出7株大肠杆菌,其中吉林地区分离出3株,秦皇岛地区分离出4株,对分离株的耐药性、致病性进行了分析。结果表明:分离株在伊红美蓝培养中生长为暗黑色菌落,光照下有金属光泽且有淡淡臭气;革兰氏染色结果为阴性;分离株的α-D-乳糖、D-果糖、肌醇、L-乳酸、D-水杨苷、L-组胺等反应均为阳性,与大肠杆菌鉴定标准相符合;16SrRNA序列与数据库中大肠杆菌同源性达到98-99%。药敏结果表明对头孢他啶、头孢曲松2种抗生素高度敏感;对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、卡那霉素、四环素、克林霉素、杆菌肽等8种抗生素耐药。小鼠的致病性研究结果表明:攻毒12h后出现精神萎靡、嗜睡、进食量下降现象,攻毒24h时小鼠呈现出聚堆、浑身战栗、毛发凌乱等现象,并出现死亡,所有小鼠于96h内全部死亡。
2.貉肺部肺炎克雷伯菌的分离鉴定
共计分离出5株肺炎克雷伯菌,其中吉林地区分离出2株,秦皇岛地区分离出3株,对分离株进行了粘丝试验、血清型分析、毒力基因检测、药敏试验及致病性试验。结果表明:分离株在麦康凯培养基上生长发酵,形成较大的粘液型红色菌落,红色可扩散至菌落周围的培养基中;革兰氏染色结果为阴性;分离株的α-D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-甘露糖、D-山梨醇、D-水杨苷等反应均为阳性,与肺炎克雷伯菌鉴定标准相符合;其16SrRNA序列与数据库中肺炎克雷伯菌同源性达到90-99%。药敏结果表明对头孢他啶、氧氟沙星、阿米卡星、氟苯尼考4种抗生素高度敏感;对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、红霉素、卡那霉素等11种抗生素耐药,表现出极强的耐药性。粘丝试验结果均为阴性。血清型分析结果为分离株不属于6种荚膜血清型的任何一种。毒力基因检测结果显示:11种毒力基因共检出5种毒力基因,分别为fim、kfu、uge、ure、wabG基因。小鼠的致病性研究结果表明:经腹腔注射的小鼠攻毒12h后出现呼吸急促、精神萎靡、卧地不起、进食量下降现象,攻毒24h时出现死亡,其余小鼠站立不稳,被毛逆立、无光泽,攻毒96h时小鼠全部死亡。
3.貉血液中血虫体的检测
收集上述病貉未凝血,对血液细胞进行形态观察、多种染色镜检检测血液病原微生物。结果表明:30份血液的红细胞中均寄生有不同程度的血虫体,其中吉林地区病貉血虫体平均感染率为42.9%,秦皇岛地区病貉血虫体平均感染率为30.1%。感染血虫体的红细胞失去正常红细胞两面凹陷的扁平圆饼状形态,表面附着多个大小不一的血虫体,呈现出星芒状、锯齿状;姬姆萨染色将血虫体染色为蓝紫色;亚甲蓝染色将血虫体染色为深蓝色;迪夫染色将血虫体染色为紫红色。