银杏黄酮对体外高压培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡及骨架形态结构影响的研究

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目的:(1)观察压力对视网膜神经节细胞形态、凋亡、周期及骨架微丝肌动蛋白形态结构的影响。(2)观察银杏黄酮对体外培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡、周期及骨架微丝肌动蛋白形态结构的影响。方法:(1)建立大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)体外常规及高压培养模型。(2)将常规培养的RGCs分为常压组、高压组,通过形态学观察压力对RGCs的影响。(3)将常规培养的RGCs分为常压组、高压组、银杏黄酮低、中、高剂量组(50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml)五组。待RGCs铺满瓶底后,将低、中、高剂量组中分别加入银杏黄酮,使培养液的浓度分别达到50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml,然后用80mmHg压力对高压组、低、中、高剂量组加压培养4h后收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及细胞周期改变情况。(4)常压培养的RGCs分为以上五组,待其爬满玻片后,将低、中、高剂量组分别加入银杏黄酮,药物浓度及加压过程同方法(3),共聚焦显微镜检测细胞骨架微丝肌动蛋白形态结构的变化。结果:(1)RGCs鉴定:Nissel小体染色,细胞中间有蓝色小体,证明为RGCs。(2)高压组(80mmHg培养4h)细胞形态发生改变,核膜收缩成新月体状,核体积缩小,边界模糊,轴突萎缩变细,凋亡率增高,细胞骨架微丝肌动蛋白断裂;细胞周期无明显改变。(3)低、中、高剂量组细胞凋亡率明显低于高压组(P<0.01);(4)高剂量组细胞凋亡率明显低于中、低剂量组(P<0.01),但与常压组比较无统计学差异(P>0.05);各组间细胞周期各期变化不明显,无统计学差异((P>0.05)。(5)低、中、高剂量组细胞骨架微丝断裂情况明显低于高压组;(6)高剂量组细胞骨架微丝断裂情况与中、低剂量组形态有差别。结论:(1)压力作用促进细胞凋亡,(2)高压能影响RGCs骨架微丝蛋白断裂或重排,改变细胞形态。(3)银杏黄酮对高压所致RGCs的损伤有保护作用,这种保护作用可能是通过抑制细胞凋亡和细胞骨架微丝断裂来实现的。(4)银杏黄酮对RGCs周期的影响无统计学意义
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