【摘 要】
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[目的]（1）对复发性外阴阴道假丝酵母菌病（Recurrent vulvovaginal candidiasis,RWC）、外阴阴道假丝酵母菌病（Vulvovaginal candidiasis,VVC）患者的阴道致病白假丝酵母菌进行筛选,选出天冬氨酸蛋白酶（Aspartic acid Protease,Sap）、磷脂酶（Phospholipases,PL）酶活性均为阳性的菌株,比较Sap、PL酶
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（ID:81660248）；
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[目的]（1）对复发性外阴阴道假丝酵母菌病（Recurrent vulvovaginal candidiasis,RWC）、外阴阴道假丝酵母菌病（Vulvovaginal candidiasis,VVC）患者的阴道致病白假丝酵母菌进行筛选,选出天冬氨酸蛋白酶（Aspartic acid Protease,Sap）、磷脂酶（Phospholipases,PL）酶活性均为阳性的菌株,比较Sap、PL酶活性的差异（2）验证法尼醇（Farnesol）对RVVC、WC致病白假丝酵母菌分泌的Sap、PL酶活性的影响;（3）探讨法尼醇对白假丝酵母菌Sap、PL相关基因SAP4-6、PLB1-2mRNA表达的影响。[方法]（1）收集妇产科RVVC、VVC患者的阴道分泌物,分离纯化菌株,以科马嘉显色培养基、生物梅里埃系统鉴定法明确菌种;以牛奶培养基、蛋黄培养基分别对致病白假丝酵母菌临床菌株进行筛选,选出Sap、PL酶活性均为阳性的实验菌株,进行Sap、PL酶活性的测定比较;（2）配制含有不同浓度法尼醇的牛奶培养基、蛋黄培养基,测定并比较法尼醇体外干预后致病白假丝酵母菌以及标准菌株SC5314的Sap、PL酶活性;（3）不同浓度法尼醇干预白假丝酵母菌,采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术（Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）对白假丝酵母菌 Sap、PL 相关基因SAP4-6、PLB1-2 mRNA的表达水平进行检测。[结果]（1）收集获得RVVC、VVC患者致病白假丝酵母菌各74株、84株;经培养基培养筛选出Sap、PL酶活性均为阳性的RVVC、VVC致病白假丝酵母菌各30株,RVVC组、VVC组、标准菌株SC5314组Sap酶活性（PA值）分别为0.45±0.08、0.40±0.08及0.58±0.05,各组组间比较均有统计学差异（P＜0.05）,其中VVC组的Sap酶活性最强,RVVC组、VVC组的Sap酶活性均比标准菌株SC5314强;RVVC组、VVC组、标准菌株SC5314组PL酶活性（PZ值）分别为0.63±0.12、0.63±0.10,0.64±0.03,各组组间比较未检出统计学差异（P＞0.05）。（3）各组均与各自的空白对照相比,对同一组别在不同浓度法尼醇干预下的Sap酶活性（PA值）比较如下:RVVC、VVC组致病白假丝酵母菌在法尼醇（800、1600、3200μmol/L）干预下Sap酶活性呈下降趋势,P值均＜0.05;标准菌株 SC5314 组在法尼醇（400、800、1600、3200 μmol/L）干预下Sap酶活性呈下降趋势,P值均＜0.05;RVVC、VVC、SC5314组白假丝酵母菌分别在不同浓度法尼醇（200、400、800、1600、3200 μmol/L）干预下的PL酶活性与各自的空白对照相比,均未检出统计学差异（P＞0.05）。（3）qRT-PCR扩增后结果显示:在法尼醇（1600 μmol/L）干预下,RVVC组SAP4、PLB1、PLB2分别上调74%、113%、136%;VVC组PLB1、PLB2分别上调113%、107%;在法尼醇（3200μmol/L）的干预下,RVVC组SAP4、PLB1、PLB2表达分别上调150%、139%、152%;VVC 组 SAP4、SAP6、PLB1、PLB2分别上调 147%、92%、105%、79%;标准菌株组PLB1、PLB2分别上调264%、359%,RVVC组SAP4在法尼醇（1600、3200 μmol/L）干预下,表达分别上调74%、150%,VVC组在法尼醇（3200μmol/L）干预下,SAP4、SAP6表达分别上调147%、92%,标准菌株 SC5314 组在法尼醇（200、400、800、1600、3200μmol/L）干预下SAP4-6表达均无显著影响（P＞0.05）。[结论]1、VVC致病白假丝酵母菌的天冬氨酸蛋白酶活性最强,而RVVC、VVC致病白假丝酵母菌的天冬氨酸蛋白酶活性均强于标准菌株SC5314。2、法尼醇能在体外抑制RVVC、VVC致病白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶的分泌,且随着法尼醇浓度增加,抑制作用增强。3、法尼醇对RVVC、VVC致病白假丝酵母菌的磷脂酶表达无抑制作用。4、法尼醇可能通过下调白假丝酵母菌SAP4-6以外的家族基因来抑制天冬氨酸蛋白酶的分泌。
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