养精胶囊通过Sertoli细胞改善睾丸微循环促进睾丸生精功能的作用机制

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[目的]观察养精胶囊提取液(Yangjing capsule extract,YCE)对小鼠支持细胞(Sertoli cells)生殖,以及YCE对其中的Occludin、VEGF和其受体、NO及其合酶的影响。[方法]将小鼠Sertoli细胞系TM4作为实验的目标,培养细胞至70%丰度时,加入相应浓度的YCE继续孵育12小时后,使用CCK-8法检测细胞增殖活性。在TM4细胞生长对数期消化收集细胞,调整浓度,加入6孔板每孔约8万细胞,加入不同浓度的YCE,继续孵育24小时后,直接去上清液测定其中NO的含量,收集细胞,提取其中的mRNA或蛋白,分别使用qPCR以及Western-Blot来分析其中 Occludin、VEGFA、FLT 和 FLK、eNOS(NOS3)中的表达情况。[结果]YCE作用于TM4细胞12 h后,发现TM4细胞的增殖能力与对照组相比显著提高,可以增强其活性。YCE作用TM4细胞24小时后,发现VEGFA的mRNA和蛋白与对照组之间对比没有明显差异(P>0.05);而YCE对Occludin、VEGFA、FLK等因子在各剂量组与对照组相比在mRNA和蛋白的表达都有显著提高(P<0.05);YCE对FLT和eNOS作用时与对照组相比,低剂量组没有显著差异,中、高剂量组差异显著(P<0.05)。[结论]YCE能够提高TM4细胞增殖能力,YCE可以增加TM4细胞中的和NO含量、Occludin、VEGF受体、NO合酶中的mRNA和蛋白表达量,而且之间存在着剂量依赖性。说明养精胶囊可以通过改善TM4细胞增殖能力,增强生精环境的稳定,增加VEGF和NO含量增加睾丸局部微循环,增强局部代谢能力,改善睾丸生精环境。
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