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目的:探究钙敏感受体(Calcium-sensing Receptor,CaSR)在大鼠脊髓神经元中的表达情况,进一步研究CaSR对大鼠脊髓神经元缺氧复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的影响及机制,为治疗脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)指出新的研究方向及治疗靶点。方法:1.从健康新生SD大鼠中提取脊髓神经元,应用免疫荧光技术鉴定脊髓神经元并观察CaSR在脊髓神经元中的表达定位。2.建立大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤模型并评价。3.应用Gd Cl3(CaSR激动剂)、NPS-2390(CaSR抑制剂),将脊髓神经元随机分成4组:正常对照(control)组、缺氧/复氧(A/R)组、A/R+Gd Cl3组、A/R+NPS-2390组。采用免疫印迹法(Western-blotting)检测各组CaSR蛋白表达水平;应用荧光定量PCR技术检测各组CaSR m RNA的表达。应用激光共聚焦显微镜(Laser Confocal Scanning Microscope,LCSM)测定细胞内游离钙浓度([Ca2+])的变化,同时观察Gd Cl3和NPS-2390对细胞内游离钙的影响。4.采用原位末端标记法(Td T-mediated biotinylated-d UTP nick-end labeling,Tunel)观察各组细胞凋亡情况,并用Western-blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果:1.CaSR在大鼠脊髓神经元中有表达,并且主要分布在神经元胞膜和胞浆中。2.大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤模型建立成功,模型组的CaSR蛋白较对照组表达高。3.模拟脊髓神经元缺氧复氧损伤后CaSR蛋白、CaSR m RNA表达明显增加,Gd Cl3能够使缺氧复氧损伤所诱发的CaSR蛋白、CaSR m RNA表达进一步增加,而NPS-2390的作用则相反。模拟缺氧复氧损伤后细胞内游离钙表达明显增加,Gd Cl3能够使缺氧复氧损伤所诱发的细胞内游离钙表达进一步增加,而NPS-2390的作用则相反。4.模拟脊髓神经元缺氧复氧损伤后凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白表达进一步增加,Bcl-2蛋白表达进一步减少,脊髓神经元凋亡加重;Gd Cl3组进一步加重损伤,而NPS-2390的作用则相反。结论:CaSR在大鼠脊髓神经元中有广泛的表达,并且主要分布在神经元胞膜和胞浆中。建立大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤模型后可发现CaSR表达增加,细胞内游离钙增加,脊髓神经元凋亡增多,CaSR激动剂Gd Cl3可使CaSR表达进一步增加,加重脊髓神经元损伤,而CaSR抑制剂NPS-2390可使CaSR表达减少,减轻脊髓神经元的损伤。提示临床上脊髓缺血再灌注损伤中对CaSR的干预可成为治疗疾病的新思路。