【摘 要】
：
苹果黑腐皮壳菌（Valsa mali var.mali,Vmm）引起的苹果树腐烂病给陕西乃至全国苹果生产造成了严重的威胁。了解该病菌的致病相关基因,将有助于深入认识该病害致病机理,对该病害的科学有效防控有重要意义。但是,到目前为止,关于该病菌致病相关基因未见报道。根癌农杆菌介导的遗传转化由于简单方便而被广泛用于真菌致病相关基因的研究。因此,为了发掘该病菌的致病相关基因,本研究首次将根癌农杆菌介导的
【基金项目】
：
国家自然科学基金（31171796）； 公益性行业（农业）科研专项（201203034）； 高等学校博士学科点专项科研基金（20120204110002）； 陕西省科技统筹创新工程计划项目（2011KTZB02-02-02）；
论文部分内容阅读
苹果黑腐皮壳菌（Valsa mali var.mali,Vmm）引起的苹果树腐烂病给陕西乃至全国苹果生产造成了严重的威胁。了解该病菌的致病相关基因,将有助于深入认识该病害致病机理,对该病害的科学有效防控有重要意义。但是,到目前为止,关于该病菌致病相关基因未见报道。根癌农杆菌介导的遗传转化由于简单方便而被广泛用于真菌致病相关基因的研究。因此,为了发掘该病菌的致病相关基因,本研究首次将根癌农杆菌介导的遗传转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation）引入 Vmm,利用携带pBIG2RHPH2-GFP-GUS质粒的根癌农杆菌EHA105对苹果树腐烂病菌（Vmm）分生孢子进行转化,建立并优化了遗传转化体系,构建并评估了转化子文库。所得转化体系及转化子文库将为苹果树腐烂病菌致病相关基因的发掘奠定良好的技术和材料基础。本研究主要结果如下:1.建立了Vmm的转化体系,并对过滤膜,农杆菌培养条件进行了优化。结果发现（1）过滤膜可以省略;（2）根癌农杆菌的MM培养环节可由LB培养代替;（3）根癌农杆菌的IM培养环节中AS（Acetosyringone）对转化效率无影响;（4）根癌农杆菌的IM培养环节可以省略。最简便体系为LB-CM。2.通过对共培养时间,根癌农杆菌数量进行优化,得出优化体系为:根癌农杆菌经过LB过夜培养后,不经过IM培养,调节OD660至0.3,与Vmm分生孢子悬浮液（106个/mL）直接混合后共培养于CM上2 d,再用含有抗生素的PDA覆盖。转化效率约为26个转化子/105个分生孢子。3.由于通过携带pBIG2RHPH2-GFP-GUS质粒的根癌农杆菌EHA105进行转化所得转化子检测不到绿色荧光.;含pSK1044质粒的根癌农杆菌SK1044被用于对Vmm的转化,结果显示Vmm被gfp（green fluorescent protein）成功标记。4.构建了约6000个转化子组成的文库,并对文库进行了质量评估。结果显示249株随机挑选的转化子通过连续5次无筛选培养,243株转化子依然能够在含有60μg/mL潮霉素B的PDA上生长,表明转化子有丝分裂稳定;20株随机挑选转子均能通过PCR扩增出相应条带,表明hph基因（hygromycin B phosphotransferase）被成功整合到Vmm基因组上;对随机挑选的致病突变体进行Southern blot分析显示,所挑选的菌株均含有hph基因,并有27.8%（5/18）的致病突变体为T-DNA单拷贝插入。
其他文献
＜正＞桂政办发〔2021〕120号各市、县人民政府,自治区人民政府各组成部门、各直属机构:《广西支持国家区域医疗中心建设运营政策清单》已经自治区人民政府同意,现印发给你们,请认真贯彻执行。2021年11月23日广西支持国家区域医疗中心建设运营政策清单根据国家发展改革委等部门印发的《区域医疗中心建设试点工作方案》,按照自治区党委、自治区人民政府部署,为大力支持国家区域医疗中心建设运营,现制定如下政策
地下管线是城市物质流、能量流和信息流的主要通道,是城市重要的基础设施和“生命线”。近年来,随着“数字城市”建设的推进,地下管线地理信息系统正逐步成为支撑城市规划、建设和管理的核心信息化应用,并在城市地理信息共享中发挥日益重要作用。然而,城市中普遍存在的综合地下管线地理信息系统和众多面向管线权属单位的专业地下管线地理信息系统却异构明显,从而使得地下管线信息化应用的深入发展与管线共享之间的矛盾日益突出
果实品质是酿造优质葡萄酒的基础,整形方式和叶幕组成对浆果品质有重要的影响。本研究于2012年在中信国安葡萄酒业股份有限公司新疆玛纳斯酿酒葡萄基地进行,以2000年定植的酿酒葡萄赤霞珠为材料,利用LI-6400便携式光合作用测定仪分别于浆果膨大期、转色期及成熟期系统研究了倾斜主干水平龙蔓形,双主蔓扇形和多主蔓扇形的叶片净光合速率、光合日变化、光合生理生态因子等光合特性,并分析了不同整形方式对赤霞珠生
目的探讨意向性牙再植术中的四手护理配合的流程。方法选取经根管治疗后仍然存在不良反应的且需要行意向性牙再植的疑难病例16例,专科护士配合医生在牙科显微镜下四手操作行意向性牙再植术。结果初步建立了意向性牙再植术的护理流程与操作规范。术后一个月复查,除1例牙因松动拔除外,其余15例收到满意的临床效果。结论高效规范的四手护理配合对确保意向性牙再植术的成功具有重要作用。
以酿酒葡萄品种赤霞珠（Vitis L.,cv.Cabernet Sauvignon）为试材,采用RT-PCR方法获得了两个脂氧合酶（Lipoxygenase,LOX）基因的全长序列,分别命名为VvLOX1、VvLOX2,并在原核细胞中表达。研究了在果实发育时期、机械创伤处理与外源茉莉酸甲酯（Methyl jasmonate,MeJA）处理下,VvLOX1、VvLOX2基因的表达特性,并对葡萄果皮中
＜正＞早在2009年,原卫生部曾出台《区域医疗中心设置原则（试行）（征求意见稿）》,提出国家医疗中心按照七个区域进行设置,每个区域内设置1-3个国家医疗中心,相关专科专业设置1-3个国家专科性医疗中心。这也标志着区域医疗中心在新一轮医疗卫生改革启动背景下被提上日程。2017年1月,原国家卫生计生委印发《"十三五"国家医学中心及国家区域医疗中心设置规划的通知》,要求在每个省份遴选在医、教、研、防、管
酿酒酵母是葡萄酒酿造过程中最主要的微生物,研究其多样性有助于酵母菌资源的开发和利用,有利于优良酿酒酵母菌种选育,对研究其表型差异的遗传基础和解释物种进化史意义重大。本研究采用4个微卫星标记（ScAAT1、YOR267c、C11、YPL009c）对来自UCD菌种保藏库的酵母菌、商业酵母以及来自陕西泾阳的酿酒酵母共176株酵母菌的遗传多样性进行了分析,毛细管电泳检测PCR扩增产物的片段大小,用PopG
根际促生菌（plant growth promotion rhizobacteria,PGPR）为生长在植物根际的、通过直接或间接作用机制、促进植物生长及保护植物免受外界不利条件影响的细菌群体。它们对于可持续农业发展有重要意义。其中,溶磷菌是PGPR中一个重要群体,它们通过提高上壤中有效磷水平来促进作物生长。然而,在实际应用中,它们的溶磷作用会受到多种环境因素的影响。因此,本研究旨在研究各种环境胁
高活性及低毒性的杂环类化合物是近年来农药杀菌剂合成领域研究的热点。在新农药的研究与合成过程中,含氮杂环类化合物的研究占有很重要的地位。其中,三氮唑类杀菌剂是菌体内麦甾醇生物合成抑制剂,由于此类化合物具有强内吸性,广谱性,高效性和持效期长等活性特点,已经成为新农药研制的一个重要方向。2-（4-氯苯基）-2-（1H,1,2,4-三唑-1-甲基）己腈是一种新型的三氮唑类杀菌剂。其分子中的三唑基团及丁基使
小麦黄矮病是我国流行最广泛、危害最严重的麦类病毒病之一。该病害是由大麦黄矮病毒（barley yellow dwarf viruses,BYDVs）引起的,由蚜虫介体进行专化型传播,小麦感病后植株表现出矮化、叶片蜡质黄化和无效分蘖增多等症状,严重影响小麦的产量。目前,农业生产中主要采用农业防治和化学防治相结合的综合治理方法,以期达到防病增产的作用,然而,防治效果有限。随着生物技术的进步,从上个世纪