【摘 要】
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选择标记基因在植物遗传转化中至关重要,但其作用只存在于转化初期阳性转化子的筛选,成熟转基因作物中选择标记基因的存在大大增加其投放环境后的风险,比如超级杂草的产生等
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选择标记基因在植物遗传转化中至关重要,但其作用只存在于转化初期阳性转化子的筛选,成熟转基因作物中选择标记基因的存在大大增加其投放环境后的风险,比如超级杂草的产生等。彻底有效地解决这一问题的方法即选择标记基因的删除,利用诱导型位点特异性重组系统是目前行之有效并具有很大应用前景的手段。本研究利用新型位点特异性重组系统Par A/MRS构建了低温诱导删除植物表达载体pXL5523-fwcs-RDA,利用基因枪转化法和农杆菌转化法分别对小麦绵阳19的幼胚愈伤组织和成熟胚愈伤组织进行转化,并对前期获得的转基因后代植株进行抗旱性检测,实验结果如下:(1)低温诱导的ParA-MRS重组植物表达载体的构建及转化构建了由小麦中低温启动子wcs120诱导表达的、含有抗旱基因PYL5的植物表达载体pXL5523-fwcs-RDA,通过基因枪和农杆菌转化法转化小麦绵阳19,分别获得6株、7株转基因阳性植株,经过初步鉴定基因枪转化的阳性植株中有3株完成了选择标记基因的删除,为进一步研究ParA-MRS重组系统在无标记基因转化中的应用奠定了基础。(2)转基因后代小麦抗旱性检测对前期转化获得的PYL5基因转基因后代进行了抗旱性检测。与对照相比,转基因小麦干旱处理后萎蔫程度明显小于野生型,且复水后较快的恢复生长;干旱处理过程中,转基因小麦叶绿素含量降低程度及水分丧失程度均小于非转基因小麦,而可溶性糖积累高于非转基因小麦,在高渗条件芽和根的延伸速度均小于野生型,结果初步证明PYL5基因转基因后代植株抗旱性提高,为小麦抗旱遗传改良奠定基础。
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