【摘 要】
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目的:使用离心法从新西兰大白兔心脏血分离富含血小板和生长因子的纤维蛋白液,探讨其促进胶原沉积,改建和促进伤口愈合的可能机制,并用于皮肤全层缺损模型修复,为今后进一步研究和临床应用提供基础。研究方法:使用3000rpm 10分钟单次离心法,提取血液中的富含血小板和生长因子新型纤维蛋白液,通过冻干后进行SEM检测断面形貌,测试纤维结构的孔径分布,Masson染色法观察纤维,血细胞计数对比新型纤维蛋白液
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目的:使用离心法从新西兰大白兔心脏血分离富含血小板和生长因子的纤维蛋白液,探讨其促进胶原沉积,改建和促进伤口愈合的可能机制,并用于皮肤全层缺损模型修复,为今后进一步研究和临床应用提供基础。研究方法:使用3000rpm 10分钟单次离心法,提取血液中的富含血小板和生长因子新型纤维蛋白液,通过冻干后进行SEM检测断面形貌,测试纤维结构的孔径分布,Masson染色法观察纤维,血细胞计数对比新型纤维蛋白液与全血中细胞成分比例。MTT法测试新型纤维蛋白液对皮肤成纤维细胞的促增殖效果。固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）法测试PDGF,VEGF,TGF-β,IGF,FGF,EGF等生长因子的释放情况。RTPCR探究其对成纤维细胞MMP1,MMP9,TIMP1,TIMP2等基因表达的影响。建立裸鼠背部全层皮肤缺损模型（d=5mm）,并设立纤维蛋白液组、生理盐水+细胞组、纤维蛋白液+细胞组和空白对照组（生理盐水）,注射于缺损区周围皮下,拍摄照片后使用软件测算各组创面在第2、4、7天的面积,绘制愈合曲线;在术后7日获取标本,通过标本HE染色,免疫组化染色检测等方法观察和检测Col-1、VEGF、v WF的表达水平,评估其对于体内的促进胶原沉积和血管新生的作用。研究结果:（1）全血离心提取获得的纤维蛋白液,冻干后显示结构疏松多孔,胶原纤维结构中网络大量的细胞成分,对PDGF,VEGF,TGF-β,IGF,FGF,EGF等生长因子具备了至少15天的的缓释能力。（2）对于皮肤成纤维细胞具有较为明显的促进增殖作用。能够抑制细胞对I型胶原酶的分泌,同时增加I型胶原和III型胶原的产生。能够促进TIMP-1和TIMP-2的表达,并呈现浓度依赖性,同时降低MMP-1和MMP-9的表达。（3）裸鼠全层皮肤缺损的修复效果显示,运用了新型富血小板纤维蛋白液的皮肤缺损在第7天伤口愈合速度相较于对照组有显著统计学差异,缺损区表面均被新上皮覆盖,角化完全,基本无炎性反应,新生表皮相对平整,皮肤结构清晰,层次明显,薄厚均匀连续,新生皮肤表面与周围正常皮肤组织结构相似且接续良好。结论:新型富血小板纤维蛋白液具备良好的生物相容性,对于多种生长因子的释放具备缓释能力。能够一定程度抑制细胞的I型胶原酶的分泌,同时增加I型胶原和III型胶原的产生,促进皮肤成纤维细胞TIMP-1和TIMP-2的表达,同时降低MMP-1和MMP-9的表达,调节细胞外基质代谢。搭载细胞或单独使用都能够促进全层皮肤缺损的修复。
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