巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)产排胶的过程是一种复杂的创伤反应,受到多种环境因素以及茉莉酸和乙烯等植物激素调控。茉莉酸和乙烯等植物激素是通过调控下游转录因子来调控其生理反应,如通过调控MYB基因的表达,调节尼古丁的生物合成和冷胁迫应答。为了研究茉莉酸和乙烯相关的MYB基因参与的橡胶产排胶和非生物胁迫的分子机理,本文系统克隆了巴西橡胶树MYB基因家族并鉴定其功能,获得以下研究结果:(1)利用橡胶树转录组数据和NCBI的橡胶cDNA序列,通过比对MYB基因高度保守的DNA结构域筛选和电子克隆拼接,得到141个橡胶MYB基因(HbMYBs)。(2)通过反向Northern技术,分析在创伤、乙烯处理和茉莉酸处理后HbMYBs基因的差异表达,筛选茉莉酸和乙烯相关基因,并利用qRT-PCR技术进行验证。获得10个差异表达的HbMYB基因,然后进行生物信息学分析。(3)分别构建pCAMBA 1300-GFP-HbMYBs载体和pGBKT7-HbMYBs载体,对HbMYBs蛋白进行亚细胞定位和酵母转录自激活分析,结果发现:大多HbMYBs基因翻译后的蛋白定位于细胞核,具有转录活性,具有转录因子特性。(4)构建pGADT7-HbMYBs载体,与实验室已有的pGBKT7-JAZs,pGADT7-HbICEs等载体共转化于Y2H Gold酵母菌株,筛选能够用于HbMYBs蛋白互作的蛋白。研究发现:HbMYB15,HbMYB75蛋白能够与HbICE1蛋白互作;HbMYB15,HbMYB75 和 HbMYB21 蛋白能够与 HbICE2 蛋白互作。表明 HbMYB15,HbMYB21和HbMYB75可能参与橡胶冷胁迫应答。qRT-PCR结果也发现这三个基因的表达受冷诱导调控。(5)将pGADT7-HbMYBs载体与实验室已有的含有多个顺式作用元件的pAbAi酵母单杂载体共转于Y1H Gold酵母菌株,筛选与橡胶MYB转录因子互作的顺式作用元件。研究发现:HbMYB15,HbMYB21,HbMYB35,HbMYB75 蛋白能够与 G-box,JRE发生互作;HbMYB76蛋白能够与ABARE,GCC,DRE发生互作;HbMYB17,HbMYB77蛋白能够与GCC发生互作。-本文的研究结果表明,HbMYBs 转录因子参与橡胶树的多个激素调控途径,橡胶树中HbMYB15,HbMYB75和HbMYB21基因可能参与巴西橡胶树的冷胁迫应答。HbMYBs能够与多种顺式作用原件结合而调控靶基因,这些结果为筛选HbMYBs基因的靶基因奠定基础。