【摘 要】
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食源性细菌、真菌毒素和抗生素等食品危害物对人类生命健康和全球粮食安全构成严重威胁。因此,建立高灵敏的现场检测技术对于早期、即时有效地监管食品卫生安全,保障消费者健康具有重大意义。侧流免疫层析(Lateral flow immunoassay,LFA)方法作为目前非常成熟的即时检测(Point of care testing,POCT)工具被普遍应用于临床疾病快速筛查、微生物检测以及环境监控等领域。
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食源性细菌、真菌毒素和抗生素等食品危害物对人类生命健康和全球粮食安全构成严重威胁。因此,建立高灵敏的现场检测技术对于早期、即时有效地监管食品卫生安全,保障消费者健康具有重大意义。侧流免疫层析(Lateral flow immunoassay,LFA)方法作为目前非常成熟的即时检测(Point of care testing,POCT)工具被普遍应用于临床疾病快速筛查、微生物检测以及环境监控等领域。然而,传统免疫层析所使用的基于胶体金纳米颗粒(Au NPs)的信号标签难以满足在复杂的食物样品中多个目标物的快速灵敏检测,从而严重阻碍了免疫层析更为广泛的应用。为此,本研究以新型光学信号标签的设计开发为切入点,将荧光和表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman scattering,SERS)两种信号模式引入免疫层析系统,用于提高检测的灵敏度和准确性。鉴于复杂样本中目标分析物的检测对于信号标签的材料稳定性和信号强度有着高要求,本研究以二氧化硅(SiO2)和四氧化三铁(Fe3O4)为核心,制备具有高荧光强度和SERS信号的新型壳核状纳米复合材料。在此基础上,建立了三种拥有同时检测多种目标分析物能力的高通量免疫层析方法,包含针对大分子目标物(细菌)检测的夹心检测模式和针对小分子目标物(真菌毒素、抗生素)的竞争检测模式。主要研究结果如下:(1)提出了一种基于二氧化硅-量子点(Quantum dot,QD)的荧光免疫层析方法,可同时检测食品样品中的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhi)和大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7。设计了一种具有双层量子点外壳的二氧化硅-量子点纳米微球(Si@DQD)作为先进的荧光标签,为实际样品检测提供了卓越的荧光信号和良好的稳定性。在优化的条件下,此方法可在15 min内同时鉴定食品样品中的S.typhi和E.coli O157:H7,检测限都达到了50 cells/m L,比基于胶体金的免疫层析方法的灵敏度提高约200倍。(2)提出了一种多通道荧光免疫层析方法,使用功能化的磁性量子点作为捕获/检测的双功能免疫探针,可以同时灵敏地检测食品中的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)和伏马毒素B1(Fumonisin B1,FB1)。设计的抗体修饰的多层磁性量子点纳米微球(MagQBD)能够从复杂的溶液中有效捕获目标真菌毒素。通过读取三条检测线上的荧光信号,可以实现在一个免疫层析条上同时对三种真菌毒素的定量分析。由于双层量子点外壳的荧光信号放大作用和磁性内核的对目标分析物的富集浓缩能力,基于MagQBD的免疫层析的检测灵敏度显著提高。在优化的条件下,此方法对AFB1、OTA、FB1的检测限分别为0.42、11.48和4.21 pg/m L。通过对大米、花生、玉米和果汁等实际样品的检测,进一步证实了该方法良好的准确性、特异性和稳定性。(3)提出了一种基于磁性SERS纳米微球的免疫层析方法,可以实现一条检测线同时高灵敏地检测复杂样品中的氯霉素(Chloramphenicol,CAP)和卡那霉素(Kanamycin,KAM)。设计并合成了一种具有优秀磁响应能力的金壳磁性纳米微球(Mag@Au-Au),可以在复杂样本中的高效捕获和富集目标物。材料表面丰富热点为其提供了出色且稳定的SERS性能。将分别修饰两种拉曼报告分子的信号标签引入免疫层析系统,进一步提升了检测通量。在优化的条件下,所提出的基于SERS的免疫层析系统可以实现在一条检测线上对KAM和CAP的同时定量检测,检测限低(0.54和0.67 pg/m L),检测时间短(30 min),且在实际样品的检测中保持高精准度。
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