负载黑磷纳米复合颗粒电纺支架的制备及其黑色素瘤靶向治疗/伤口愈合的研究

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近年来,光热疗法因其对黑色素瘤的高效、低毒和非免疫原性在临床治疗中已显示出广阔的应用前景。虽然各种光热材料得到了广泛的研究,但是光热疗法仍有许多缺陷。例如,大多数光热材料在人体内不易降解,产生有害作用,长期存在细胞毒性,且无法促进治疗部位的伤口愈合,阻碍其临床试验。因此,开发一种能够实现治疗黑色素瘤,同时促进治疗部位伤口愈合的光热支架材料具有迫切需求。
  本研究的主要内容包括:以黑磷晶体(BPC)为原料、利用液相剥离法制备黑磷纳米片(BPNSs);再使用NH2-PEG-FA对其进行保护修饰;接着装载上抗肿瘤药物DOX,并通过注射泵将该纳米复合颗粒负载到GEL/PCL电纺中。最后形成具有光热响应性的BP@DOX-PEG-FA-GP电纺支架。这个设计的主要优势是,通过PEG和电纺支架对黑磷纳米片进行保护,防止其过快降解。在近红外激光照射后,黑磷会降解并产生光热作用,与降解释放的阿霉素一起协同作用以治疗黑色素瘤。同时,电纺降解产生的明胶及黑磷降解产生的磷酸盐能够共同促进治疗部位的伤口愈合。
  (1)通过透射电镜、扫描电镜、水力学尺寸、傅里叶变换红外光谱和Zeta电位分析对纳米复合颗粒和电纺支架的形貌、结构及制备过程进行表征。通过研究电纺支架的药物释放行为以及电纺支架的光热效应,表明具有近红外激光响应性的黑磷电纺支架已成功构建。
  (2)体外研究了BP@DOX-PEG-FA-GP电纺支架的抗肿瘤及伤口愈合效率。通过细胞毒性实验(CCK-8)、颗粒内吞实验(流式细胞仪、共聚焦显微镜)和凋亡实验(细胞形态观察)验证了该电纺支架体外的抗肿瘤效率。通过生物相容性实验(CCK-8)和凋亡实验(细胞形态观察)验证了该电纺支架具有良好的促进伤口愈合的作用。
  (3)体内研究了BP@DOX-PEG-FA-GP电纺支架具有良好的抗肿瘤效率。通过一步TUNEL染色、苏木精和伊红染色法(H&E)检测肿瘤组织的形态学变化及凋亡程度,进一步验证该电纺支架的体内抗肿瘤效率。通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色和Masson染色,证明了该电纺支架在体内能有效促进伤口愈合。
  结果表明:本文成功构建了具有近红外激光响应性的黑磷电纺支架。通过体外和体内实验,证明了该黑磷电纺支架能诱导黑色素瘤细胞凋亡,而对正常皮肤细胞具有良好的生物相容性,并能促进正常皮肤细胞的增殖和粘附。因此,该电纺支架能够有效地靶向治疗黑色素瘤以及促进伤口愈合,这为黑色素瘤治疗和预后提供了新的思路。
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