前言 反复流产（RSA）是一种常见的病理妊娠，目前研究发现它与遗传、免疫、感染、解剖、内分泌等因素有关，但也有部分患者原因不明（UHA）。近年来关于母胎免疫机制的研究成为热点课题之一。目前学者们普遍认为在妊娠早期，母体的免疫系统，特别是在蜕膜与滋养细胞交界处，由Th细胞介导的免疫反应状态与妊娠关系密切。在正常妊娠早期，蜕膜表达以IL-4为主的Th₂型细胞因子，诱导母体产生免疫耐受反应，使获得“免疫逃逸”的胚胎得以在母体内继续分化发育。而RSA患者的蜕膜中则表达以IFN-γ、TNF-α为主的Th₁型细胞因子，通过激活母体其它免疫效应细胞的细胞毒作用，对胚胎产生排斥反应。对RSA和正常妊娠妇女体内T淋巴细胞及其亚群的生物学特点进行比较研究，发现随着妊娠进展，蜕膜中的TCRγδT淋巴细胞数量也相应增加，而且在正常妊娠早期，蜕膜中的TCRγδT淋巴细胞可以通过非MHC限制性方式识别绒毛滋养细胞表达的非经典的HLA-G、E抗原，并通过启动某种免疫抑制机制，调节Th₁／Th₂的平衡向Th₂方向偏移，而在RSA患者则表现向Th₁方向偏移。因此认为TCRγδT淋巴细胞在参与调节妊娠早期母胎界面的免疫反应中可能发挥重要的作用。 文献报道，反复流产患者中封闭抗体阴性者占20-35％，用丈夫的外周血淋巴细胞进行主动免疫治疗会使封闭抗体水平提高，也有研究表明主动免疫治疗可使RSA患者体内Th₁／Th₂平衡向Th₂方向偏移，因而促进妊娠向成功方向发展，因此主动免疫疗法已成为治疗RSA的一种有效手段。本试验拟通过比较RSA患者主动免疫治疗前后外周血封闭抗体、CD3淋巴细胞及TCRYST淋巴细胞水平的变化探讨TCRYST淋巴细胞在母胎免疫调节中可能发挥的作用。 实验材料与方法 一、研究对象：为就诊于中国医科大学第二临床学院优生门诊的15例自然流产ZZ次的患者。排除染色体、解剖、内分泌疾病，AS－Ah、ACA、CMV－DNA、VB19－DNA、TO—IgM及男方精液检查无异常，仅因微量淋巴毒试验结果阴性，主动要求免疫治疗。同一患者于治疗前、治疗后两周分别取血样。 二、方法： 二．封闭抗体检查：封闭抗体水平用微量淋巴毒试验杀伤性淋巴细胞数目的百分比表示，＞10％为阳性，＜10％为阴性。 2．免疫治疗： 2．1 条件：丈夫肝炎病毒、HIV、RPR血清学检查均阴性；肝功能各项指标均在正常范围内；免疫治疗在计划妊娠前一个月开始。 2．2 方法：于清晨8－9点空腹抽取丈夫静脉血10mL，用提取的淋巴细胞（约20 x 10‘个淋巴细胞八）作为免疫原对女方进行主动免疫。每周1次，4次为一疗程。 2．3 治疗有效标准：免疫治疗后，指导性生活。妊娠超过12周或超过以往流产时间经B超检查胚胎发育良好视为治疗有效。 3．标本采集：在第一次主动免疫治疗之前＼治疗结束后两周分别取女方外周血检测封闭抗体、CD3淋巴细胞及TCRYST淋巴细胞的水平。 4．试剂和抗体：FITC标记的Y盯CR单克隆抗体、PE标记 ·二·的CD3单克隆抗体均购自深圳晶美生物制品公司。磷酸盐缓冲液、单核细胞分离液＼吸管、玻璃管、离心机、流式细胞仪等由中国医科大学第一临床学院中心实验室及第二临床学院细胞遗传实验室提供。 5．CD3淋巴细胞、TCRYST淋巴细胞水平的检测：将女方静脉血200卜L提取的淋巴细胞与FITC－y盯CR单克隆抗体10pL。＊E－6＊单克隆抗体ZO卜L振荡、混匀，在一4℃、避光的条件下作用30分钟。用3mL PBS漂洗，2000rpm离心4分钟，奔上清液，上述过程重复两次后，用 0．5 mL PBS混匀、流式细胞仪检狈。 三、统计学方法 采用 SPSS统计分析软件口 0．0版」对主动免疫治疗前、后结果进行配对t检验、非参数检验及相关性进行统计分析。 结 果 一、RSA患者主动免疫治疗后的妊娠结局 15名患者在接受主动免疫治疗后，2名患者TCRYST淋巴细胞和封闭抗体水平显著提高，并分别在治疗后l、2个月未经预防性保胎，成功的妊娠。还有门名患者经监测排卵、预防性保胎再次妊娠，其中2例又自然流产，9例经随访超过以往流产时间经B超检查胚胎发育良好，妊娠成功率为84．6％门八 人另2例随访至治疗后6个月仍未妊娠。 二、主动免疫治疗前、后两组间结果比较 1．封闭抗体水平的变化：RSA患者主动免疫治疗后封闭抗体水平较治疗前显著提高； 2．外周血淋巴细胞水平的变化：CD3淋巴细胞总数治疗后无显著变化；治疗后TCRYST淋巴细胞、TCRYST淋巴细脉CD3 ·3·淋巴细胞水平较治疗前显著提高。 3．封闭抗体水平与外周血淋巴细胞水平的相关性：治疗前的封闭抗体水平与TCR恤T淋巴细胞／CD3淋巴细胞无相关性，而治疗后的封闭抗体水平与TCR呐T淋巴细胞／CD3淋巴细胞呈正相关。 讨 论 一、主动免疫治疗与RSA的关系 在正常妊娠中，滋养细