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土壤抑菌作用是影响生防菌剂防效的关键因子之一。建立土壤对细菌生防菌抑菌作用的检测方法是开展土壤抑细菌作用研究的基础。了解生防真菌应答土壤抑菌作用的分子机制对阐明土壤抑菌作用机理及解除土壤作用、提高生防菌剂防效意义重大。本文以线虫生防菌为靶标,建立了土壤抑细菌作用的检测方法;分析线虫生防真菌A.oligospora ATCC24927应答土壤抑菌作用及解除土壤抑菌作用下的转录组学特性,获得以下研究结果:1.利用绿色荧光蛋白基因及氨苄青霉素、羧苄青霉素抗性基因标记了生防细菌Bacillius amyloliquefaciens ZY-9-13;通过双抗平板传代培养及对病原真菌和线虫活性的生物活性测定实验,获得了稳定遗传且生防活性无差异的标记菌株。利用标记菌株及植烟土壤,首次构建了土壤抑细菌作用的定量检测方法。2.测定了 60份植烟土壤对B.amyloliquefaciens ZY-9-13的抑菌作用,结果表明抑菌率在10.3-41.3%之间,平均抑制率26.22%;植烟土壤pH值、土壤微生物多样性、土壤有机质含量与抑细菌作用均呈现正相关关系。3.通过 Illumina Hiseq 2500 平台测得 A.oligospora ATCC24927 孢子在氨气、苯甲醛、土壤悬液胁迫及土壤悬液胁迫解除下6个处理的转录组数据(对照孢子:AO-Ck,正常萌发孢子:AO-G24,氨气胁迫孢子:AO-Am,苯甲醛胁迫孢子:AO-Ph,土壤悬液胁迫孢子:AO-So和土壤悬液胁迫解除孢子:AO-Re),共计获得27Gb的高质量干净数据。4.利用韦恩图及信息学分析,在AO-Am处理独有高表达量(log2比值≥9)DEGs 中,4 个显著下调基因(AOL_s00006g40、AOL_s00054g405、AOL-s00097g589和AOL_s00109g181)在对照处理AO-G24中反而为上调表达;其中基因AOL-s00006g40参与Ras/MAPK信号通路,基因AOL_s00054g405参与过氧化物酶体和信号转导通路以及基因AOL_s00097g589影响酶的催化作用,这4个基因的异常下调可能是氨气抑制A.oligospora ATCC24927分生孢子萌发的主要原因。此外,从该处理组中还筛到14个与刺激响应过程相关的上调DEGs以及17个参与信号转导过程的DEGs。5从AO-Ph处理组中筛到20个与刺激响应过程相关的上调DEGs,24个参与信号转导过程的DEGs。其中参与信号转导过程的基因AOL_s00043g97和AOL_s00006g40高度下调而在对照处理AO-G24中为上调表达。基因AOL_s00043g97的KO注释为Ras相关蛋白Rab-8A,该蛋白是RAS超家族的一个成员,参与MAPK信号通路和细胞内吞作用。这两个基因的异常下调可能是苯甲醛抑制A.oligospora ATCC24927分生孢子萌发的关键基因。6.分析了利用葡萄糖解除土壤对A.oligospora ATCC24927孢子抑制的转录组,筛到18个与信号转导相关的DEGs(上调12;下调6),其中12个上调基因涉及孢子萌发中钙离子信号通路、Ras/MAPk信号通路等。在高差异表达量(log2比值≥9)的40个被注释上调DEGs中,基因编码了大量的蛋白酶类、一些翻译起始因子、某些复制因子、转录因子和无义转录本的调节器等。GO分析结果显示孢子在萌发过程上调了大量能量代谢和蛋白质合成基因。